异养原生生物卡氏棘阿米巴中的 CRISPR/Cas9 基因编辑|北京沫之东生物技术有限公司

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摘要

变形虫门（Amoebozoa）棘阿米巴属（Acanthamoeba）的成员是单细胞异养原生生物，广泛栖息于陆地和水生环境中。它们是机会性病原体，已知可携带致病细菌以及大型DNA病毒。尽管棘阿米巴常被用于研究细胞运动、吞噬作用和疾病，但用于精确编辑棘阿米巴基因组的遗传学工具仍处于起步阶段。在本研究中，我们开发了可用于对模式棘阿米巴——棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii）Neff株——进行遗传工程改造的CRISPR/Cas9工具。在原理验证实验中，我们以肌球蛋白II重链基因为靶标。通过逆转录PCR、显微镜观察和DNA测序获得了基因编辑的证据；DNA测序还鉴定出了该靶位点的独特等位基因。总体而言，我们证明了可以采用敲入策略，利用CRISPR编辑棘阿米巴基因。该研究为进一步发展棘阿米巴（A. castellanii）这一模式系统奠定了基础，从而推动对细胞与分子生物学、生物化学及进化领域中多种问题的研究。

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变形虫属（*Acanthamoeba*）成员是单细胞异养原生生物，广泛栖息于陆地和水生环境中。它们是机会性病原体，已知可寄居致病细菌以及大型DNA病毒。尽管* Acanthamoeba*常被用于研究细胞运动、吞噬作用和疾病，但针对*Acanthamoeba*基因组进行精准编辑的遗传工具仍处于起步阶段。在本研究中，我们开发了用于对模式棘阿米巴菌株*Acanthamoeba castellanii* Neff进行基因工程改造的CRISPR/Cas9工具。在原理验证实验中，我们以肌球蛋白II重链基因为靶点。通过逆转录PCR、显微镜观察和DNA测序获得了基因编辑证据；这些方法还鉴定出了靶位点的独特等位基因。总体而言，我们证明了可以采用敲入策略利用CRISPR编辑*Acanthamoeba*基因。本研究为进一步发展*A. castellanii*这一模式系统奠定了基础，使其能够用于研究细胞与分子生物学、生物化学及进化领域中的各种问题。

利益冲突声明

作者声明不存在利益冲突。

已声明的资助方信息

戈登与贝蒂·摩尔基金会，GBMF5782

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发布于2026年7月29日。

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《异养原生生物棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii）中的 CRISPR/Cas9 基因编辑》

Dudley Chung、Sari Matar、John M. Archibald

bioRxiv

2026.07.28.741101；

doi：

https://doi.org/10.64898/2026.07.28.741101

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《异养原生生物棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii）中的 CRISPR/Cas9 基因编辑》

Dudley Chung、Sari Matar、John M. Archibald

bioRxiv

2026.07.28.741101；

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https://doi.org/10.64898/2026.07.28.741101

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关键词：CRISPR/Cas9基因编辑 · 棘阿米巴 · 异养原生生物 · 基因组工程 · 肌球蛋白II重链

原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.28.741101v1?rss=1

来源出处

异养原生生物卡氏棘阿米巴中的 CRISPR/Cas9 基因编辑 https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.28.741101v1?rss=1