假尿苷（Ψ）是最丰富的RNA修饰，可调控RNA稳定性、剪接和翻译。利用Ψ的双亲核性N1和O2位点，我们此前开发了2-溴丙烯酰胺辅助环化测序（BACS），用于定量、单碱基分辨率的Ψ检测。在此基础上，我们筛选了新的双亲电试剂，并开发了甲基2-溴丙烯酸酯辅助环化测序（mBACS）。该方法具有更高的Ψ转化效率和更低的假阳性率，从而实现了更加灵敏且稳健的Ψ检测。mBACS增强的灵敏度揭示了人类tRNA中的新Ψ位点。进一步地，mBACS揭示TRUB1和PUS10是保守的tRNA Ψ55修饰的唯一冗余写入酶，并发现了Ψ55与其他tRNA修饰之间的交叉调控。此外，mBACS还揭示5-氟尿嘧啶是一种广谱假尿苷合成酶抑制剂，可诱导广泛但具有位点特异性的假尿苷化重塑。最后，mBACS仅需低至10 ng总RNA即可实现稳健的Ψ谱分析，确立了其作为一种灵敏、定量且适用于低输入样本的第二代检测平台。
chunxiao.song{at}ludwig.ox.ac.uk
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假尿苷（Ψ）是最丰富的 RNA 修饰，可调控 RNA 的稳定性、剪接和翻译。利用 Ψ 的 N1 和 O2 双亲核位点，我们此前开发了 2-溴丙烯酰胺辅助环化测序（BACS），用于以单碱基分辨率定量检测 Ψ。在此，我们筛选了新的双亲电试剂，并开发了 2-溴丙烯酸甲酯辅助环化测序（mBACS）。该方法具有更高的 Ψ 转化效率和更低的假阳性率，可实现更灵敏、更稳健的 Ψ 检测。mBACS 灵敏度的提升使我们在人类 tRNA 中发现了新的 Ψ 位点。mBACS 进一步揭示，TRUB1 和 PUS10 是催化保守 tRNA Ψ55 修饰的仅有两种功能冗余的写入酶，并揭示了 Ψ55 与其他 tRNA 修饰之间的交互作用。该方法还揭示，5-氟尿嘧啶是一种广谱假尿苷合酶抑制剂，可诱导广泛但具有位点特异性的假尿苷化重塑。最后，mBACS 仅需低至 10 ng 的总 RNA 即可实现稳健的 Ψ 图谱分析，确立了其作为灵敏、定量且低起始量的第二代平台的地位。
利益冲突声明
作者声明不存在利益冲突。
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发布于 2026 年 9 月 9 日。
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mBACS通过高效且稳健的化学转化增强假尿苷谱分析
Feng
Feng
，
Giuseppina
Pisignano
，
Linzhen
Kong
，
Thomas
Grimes
，
Paul E.
Brennan
，
Chunxiao
Song
bioRxiv
2026.09.05.749584；
doi：
https://doi.org/10.64898/2026.09.05.749584
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Feng
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关键词：假尿苷图谱 · RNA修饰 · mBACS测序 · tRNA假尿苷化 · 假尿苷合成酶 · 低输入RNA检测
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.05.749584v1?rss=1