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抗体功能取决于抗原结合Fab区与Fc结构域的分子配对，这种配对将抗原特异性与效应功能潜能相联系。然而，抗体库分析方法通常分别分析这些亚基，导致Fc-Fab连接关系丢失，从而产生推断难题。在此，我们提出一种多层级HPLC-MS工作流程，将完整血清IgG的非变性纳升级流量阳离子交换色谱-质谱（nCEC-MS）分析与Fab和Fc/2亚基的中层次（middle-up）谱分析相结合。与变性反相HPLC-MS相比，非变性nCEC-MS可降低质谱信号的拥挤程度，使每位供者的2 g纯化IgG中能够检测到56–74个完整IgG质量特征。中层次分析提供了有关Fab多样性、亚类和同种异型的互补信息，揭示了供者特异性谱图特征。利用独立测定的Fab和Fc/2亚基重建完整IgG1的质量，可部分恢复Fc-Fab分子连接关系，并为非变性条件下完整分子质量特征的解析提供支持。总体而言，该框架提供了人类IgG抗体库的整合视图，并为研究其在健康与疾病状态下的分子拓扑结构奠定了基础。
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抗体的功能取决于抗原结合 Fab 区与 Fc 结构域的分子配对，这种配对将抗原特异性与效应功能潜能联系起来。然而，抗体组库分析方法通常分别分析这些亚基，导致 Fc-Fab 连接关系丢失，从而产生推断难题。在此，我们提出了一种多层级高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）工作流程，将完整血清 IgG 的非变性纳升级流量阳离子交换色谱-质谱（nCEC-MS）分析与 Fab 和 Fc/2 的中层向上分析相整合。与变性反相 HPLC-MS 相比，非变性 nCEC-MS 可降低质谱峰的拥挤程度，使每位供者的 2 μg 纯化 IgG 中能够检测到 56–74 个完整 IgG 质量特征。中层向上分析提供了有关 Fab 多样性、亚类和同种异型的互补信息，揭示了供者特异性图谱。利用独立测得的 Fab 和 Fc/2 亚基质量重构完整 IgG1 的质量，可部分恢复 Fc-Fab 分子连接关系，并有助于解释非变性条件下的完整分子质量特征。总体而言，该框架提供了人类 IgG 组库的整合视图，并为研究其在健康与疾病状态下的分子拓扑结构奠定了基础。
利益冲突声明
作者声明不存在利益冲突。
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2026.07.30.741668;
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2026.07.30.741668;
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关键词：多克隆IgG抗体库 · 非变性质谱 · 阳离子交换色谱 · Fc-Fab分子配对 · 抗体质量重构
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.30.741668v1?rss=1