内容形式：摘要译文
基因组编辑小鼠被广泛用于阐明体内分子机制，是不可或缺的研究工具，尤其适用于旨在明确基因在个体水平上功能的研究。目前，为研究多个基因之间的相互作用，对同时修饰多个基因的小鼠的需求日益增长。值得注意的是，构建具有时间和空间特异性的条件性多基因敲除小鼠，需要在多种Cre驱动小鼠与flox小鼠之间进行大量杂交，导致品系建立周期漫长。为克服这一局限，我们开发了转座子增强多重协同编辑（Transposon Enhanced Multi Plex Orchestration Editing，TEMPO编辑），这是一种一步生成多基因编辑小鼠的策略。TEMPO编辑整合了转座子、Cre-loxP和CRISPR/Cas9系统，能够同时修饰多个基因。我们利用DNA转座子piggyBac，构建了一个包含靶向目标基因的向导RNA（gRNA）及条件性表达Cas9（lsl-Cas9）的单一表达盒。通过将该表达盒注射到Cre小鼠的受精卵中，我们实现了在F0代获得具有时间和空间特异性的基因组编辑小鼠。本研究构建了靶向Hoxa13和Hoxd13的双基因编辑小鼠，这两个基因是胚胎体型模式形成的关键调控因子，也是肢端发育所必需的。这些小鼠表现出的表型，与此前通过Hoxa13敲除小鼠和Hoxd13敲除小鼠杂交获得的小鼠所呈现的肢端发育不全表型一致。这些结果证明了TEMPO编辑在F0代生成多基因编辑小鼠方面的实用性。值得注意的是，本研究确立了一种简化的制备策略，用于生成
条件性多基因编辑小鼠，而采用传统方法完成这一过程通常需要耗费大量时间和人力。
关键词：多基因编辑 · 条件性基因敲除 · CRISPR/Cas9 · piggyBac转座子 · Cre-loxP系统 · 小鼠模型构建
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.29.741479v1?rss=1