狒狒巴拉姆希阿米巴新型环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立

狒狒巴拉姆希阿米巴（Balamuthia mandrillaris）是一种自由生活阿米巴，可引起皮肤病变、全身性疾病，以及严重危及生命的中枢神经系统（CNS）感染，即巴拉姆希阿米巴脑炎（BAE），其病死率很高（约92%）。目前，狒狒巴拉姆希阿米巴的诊断方法存在诸多局限，包括检测耗时长、灵敏度低，以及特异性诊断检测仅能在高度专业化的中心开展。由于BAE感染进展迅速，早期诊断对于治疗至关重要。因此，我们针对狒狒巴拉姆希阿米巴的18S rRNA基因开发、优化并评估了一种新型环介导等温扩增（LAMP）检测方法，该方法利用酚红显色，可通过肉眼观察结果。这种新型诊断方法能够检出10种不同的狒狒巴拉姆希阿米巴分离株，且与所检测的其他自由生活阿米巴、原虫、真菌或细菌的DNA均无交叉反应。与常规PCR相比，我们的LAMP方法在检测提取的DNA、热处理样本和未经处理的样本时，灵敏度提高了约10～100倍；其对DNA、未经处理的细胞和热处理细胞的检测限（LOD）分别为10 fg/L DNA、10个滋养体/100 L和1个滋养体/100 L。我们进一步采用两种新开发的qPCR和dPCR方法对该方法进行了验证，确定其检测限约为1拷贝/L。此外，该方法对复杂基质不具有耐受性，而LAMP在脑脊液（CSF）、尿液和血液加标样本中仍保持有效。所开发的LAMP方法具有简便、稳健和灵敏度高等特点，因此将有助于狒狒巴拉姆希阿米巴的临床快速检测与诊断，尤其适用于非专业化中心和资源有限地区。在此，我们报道首个LAMP曼氏巴拉姆希阿米巴（B. mandrillaris）的诊断方法；于2025年11月4日（星期二）在墨西哥莫雷洛斯港举行的第20届（XX）自由生活阿米巴生物学与致病性国际会议（FLAM 2025）上公开披露。

狒狒巴拉姆希阿米巴（Balamuthia mandrillaris）是一种自由生活阿米巴，可引起皮肤病变、全身性疾病，以及严重危及生命的中枢神经系统（CNS）感染，即巴拉姆希阿米巴脑炎（BAE），其病死率高达约92%。目前，狒狒巴拉姆希阿米巴的诊断方法存在诸多局限，包括检测耗时长、灵敏度低，以及特异性诊断检测仅能在高度专业化的中心开展。由于BAE感染进展迅速，早期诊断对于治疗至关重要。因此，我们针对狒狒巴拉姆希阿米巴的18S rRNA基因开发、优化并评估了一种新型环介导等温扩增（LAMP）检测方法，该方法可通过酚红显色实现肉眼判读。这种新型诊断检测方法能够检出10株不同的狒狒巴拉姆希阿米巴分离株，且与所测试的其他自由生活阿米巴、原虫、真菌或细菌的DNA均无交叉反应。与常规PCR相比，我们的LAMP方法在检测提取的DNA、热处理样本和未经处理的样本时，灵敏度提高了约10～100倍；其DNA检出限（LOD）为10 fg/μL，未经处理细胞的检出限为10个滋养体/100 μL，热处理细胞的检出限为1个滋养体/100 μL。我们进一步采用两种新开发的定量PCR（qPCR）和数字PCR（dPCR）方法对该方法进行了验证，确定其检出限约为1拷贝/μL。此外，该方法对复杂基质不具耐受性，但LAMP在脑脊液（CSF）、尿液及血液加标样本中仍保持有效。鉴于所开发的LAMP方法具有操作简便、稳健性强和灵敏度高等特点，该方法将有助于狒狒巴拉姆希阿米巴的快速临床检测与诊断，尤其适用于非专业化中心和资源有限地区。本文首次报道了LAMP

B. mandrillaris 的诊断方法；于2025年11月4日（星期二）在墨西哥莫雷洛斯港举行的第20届（XX）自由生活阿米巴生物学与致病性国际会议（FLAM 2025）上公开披露。

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关键词：狒狒巴拉姆希阿米巴 · 环介导等温扩增 · 分子诊断 · 18S rRNA基因 · 巴拉姆希阿米巴脑炎

原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.18.752794v1?rss=1