用于快速、超高灵敏度监测分泌型唾液酸糖蛋白的酶联环加成检测法（ELCA）

蛋白质糖基化是细胞信号传导、免疫功能及病原体相互作用的核心过程。然而，现有的聚糖变化监测方法需要专用仪器，且主要检测膜锚定型而非分泌型糖蛋白，同时检测周转较慢。本文提出酶联环加成分析法（Enzyme-Linked Cycloaddition Assay，ELCA），这是一种基于点击化学的平台，可超灵敏检测并半定量分析分泌型唾液酸糖蛋白。该方法通过代谢方式将修饰有叠氮基的唾液酸掺入新合成的糖蛋白，再利用应变促进环加成捕获标记物质，并采用兼容微孔板读数仪、类似 ELISA 的工作流程对整体唾液酸化水平进行定量。我们证实，分泌型糖蛋白质组能够快速响应药理学扰动，数小时内即可检测到变化。通过与常见糖基化抑制剂进行基准比较，并分析细胞因子驱动的巨噬细胞极化，进一步验证了 ELCA 的灵敏度和时间分辨率。ELCA 兼容含血清条件，且无需专用仪器，为快速、经济地监测分泌型糖蛋白动态变化提供了一种易于推广的工具。

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关键词：蛋白质糖基化 · 唾液酸化 · 分泌型糖蛋白 · 点击化学 · 酶联检测 · 糖蛋白质组学

原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.15.732414v1?rss=1