一种用于包括鲍曼不动杆菌在内的革兰氏阴性细菌基因表达的四环素诱导型启动子

由 root 提交于 周四, 10/15/2026 - 04:48
摘要

基于表达质粒的糖类诱导型启动子广泛应用于生物技术和基础科学研究。然而,以糖类作为诱导剂存在一些缺点,包括影响细菌代谢、被细菌用作碳源、导致较高的背景表达,以及仅有部分细胞发生启动子激活。此外,包括病原菌鲍曼不动杆菌在内的一些细菌目前缺乏性能良好的糖类诱导型启动子。为解决这一问题,研究人员克隆了从鲍曼不动杆菌中分离得到的四环素诱导型启动子 PtetB,并在多种重要细菌中对其进行了评估:鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和黏质沙雷菌。研究采用高灵敏度 luxCDABE 报告系统评估启动子活性,并利用环腺苷酸(cAMP)水平升高或降低的黏质沙雷菌菌株,考察 cAMP 对 PtetB 功能的影响。PtetB 在鲍曼不动杆菌中的诱导倍数超过 800 倍,在其他受测物种中为 10 至 750 倍。与此前报道的糖类诱导型启动子相比,PtetB 在假单胞菌中的背景表达更低。数据表明,PtetB 启动子系统可作为一种实用工具,用于今后对受测细菌开展基础科学研究。

表达质粒上的碳水化合物诱导型启动子广泛用于生物技术和基础科学研究。然而,以碳水化合物作为诱导剂存在一些缺点,包括影响细菌代谢、被细菌用作碳源、导致较高的背景表达,以及只有部分细胞能够激活启动子。此外,包括病原体鲍曼不动杆菌在内的一些细菌,目前尚无理想的碳水化合物诱导型启动子。为解决这一问题,研究人员从鲍曼不动杆菌中克隆并评估了一种四环素诱导型启动子 PtetB,并在多种重要细菌中进行了测试:鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和黏质沙雷菌。研究使用高灵敏度 luxCDABE 报告系统评估启动子活性,并采用细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平升高或降低的黏质沙雷菌菌株,评估 cAMP 对 PtetB 功能的影响。PtetB 启动子在鲍曼不动杆菌中的诱导倍数超过 800 倍,在其他受试菌种中为 10 至 750 倍。在假单胞菌中,PtetB 的背景表达低于此前报道的碳水化合物诱导型启动子。数据表明,PtetB 启动子系统可能是未来在这些受试细菌中开展基础科学研究的有用工具。

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关键词:四环素诱导型启动子 · 革兰氏阴性菌 · 基因表达调控 · 鲍曼不动杆菌 · luxCDABE报告系统

原文链接:https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.10.09.758105v1?rss=1