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单个的人类免疫缺陷病毒（HIV）颗粒即使在遗传上完全相同，其包膜蛋白（Env）也可能存在差异。这种非遗传多样性会影响抗体识别，并被认为参与形成能够逃避广泛中和抗体完全抑制的持续存在病毒亚群。研究HIV及其他病毒中的非遗传多样性，需要能够表征抗体与单个病毒颗粒结合情况的方法。流式病毒学为单颗粒分析提供了一种有前景的工具，但目前尚缺乏一种兼具高生物安全性、特异性颗粒标记能力和多功能性的系统。在此，我们开发了一种专为流式病毒学设计的第三代慢病毒载体系统。在HIV-1 Gag多聚蛋白的基质区和衣壳编码区之间插入荧光蛋白，并在其两侧设置病毒蛋白酶切割位点，由此构建了包装质粒pLentiFlow-eGFP和pLentiFlow-mCherry。基于pLentiFlow载体的慢病毒颗粒（LVPs）具有荧光，其感染性与采用亲本载体系统生成的LVPs相当，尽管其颗粒产量有所降低。我们优化了CytoFLEX nano上的LVP检测条件，并界定了一个基于p24的线性浓度范围，以实现可靠的单颗粒分析。通过使用互补性对照，我们证明，所评估来源产生的背景信号在宽泛的eGFP阳性门内所占事件比例不超过约3%，并证实检测到的荧光颗粒主要由膜包裹。作为概念验证，我们分别采用水疱性口炎病毒糖蛋白、严重急性呼吸综合征冠状病毒2型刺突蛋白或HIV-1 Env对LVPs进行假型化。包膜特异性抗体结合情况为分别使用 8G5F11、CR3022 或 PGT128 进行检测，结果表明，不同病毒表面蛋白可在共同的颗粒骨架上进行分析。综上，这些结果建立了一种用于流式病毒学的第三代慢病毒载体系统，该系统兼具颗粒内在标记、高生物安全性和灵活的假病毒包膜化能力。该系统为研究包膜蛋白相关的非遗传多样性及其对 HIV 和其他病毒抗体识别的影响提供了平台。
单个人类免疫缺陷病毒（HIV）颗粒即使在遗传上完全相同，其包膜蛋白（Env）仍可能存在差异。这种非遗传多样性可影响抗体识别，并被认为与持续存在的病毒亚群的形成有关，这些病毒亚群能够逃逸广谱中和抗体的完全抑制。研究HIV及其他病毒的非遗传多样性，需要能够表征抗体与单个病毒颗粒结合情况的方法。流式病毒分析术为单颗粒分析提供了一种有前景的工具，但目前尚缺乏兼具高生物安全性、特异性颗粒标记和多功能性的系统。在此，我们开发了一种专为流式病毒分析术设计的第三代慢病毒载体系统。
我们将荧光蛋白插入HIV-1 Gag多聚蛋白的基质蛋白与衣壳蛋白编码区之间，并在其两侧设置病毒蛋白酶切割位点，构建了包装质粒pLentiFlow-eGFP和pLentiFlow-mCherry。基于pLentiFlow载体生成的慢病毒颗粒（LVP）具有荧光，尽管颗粒产量降低，其感染性仍与使用亲本载体系统生成的LVP相当。我们优化了在CytoFLEX nano上检测LVP的方法，并确定了基于p24定量的线性浓度范围，以确保可靠的单颗粒分析。通过互补性对照，我们证明，在较宽的eGFP阳性门内，所评估来源产生的背景事件占比不超过约3%，并确认所检测到的荧光颗粒主要由膜包裹。作为概念验证，我们分别使用水疱性口炎病毒糖蛋白、严重急性呼吸综合征冠状病毒2型刺突蛋白或HIV-1 Env对LVP进行假型化。包膜特异性抗体的结合被
分别使用 8G5F11、CR3022 或 PGT128 检测，结果表明，可以在同一颗粒骨架上分析不同的病毒表面蛋白。
综上，这些结果建立了一种用于流式病毒学的第三代慢病毒载体系统，该系统将颗粒内在标记、高生物安全性和灵活的假型化相结合。该系统为研究 HIV 及其他病毒中与包膜蛋白相关的非遗传多样性，以及这种多样性对抗体识别的影响，提供了一个平台。
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关键词：流式病毒学 · 慢病毒载体 · 病毒包膜蛋白 · 单颗粒分析 · 抗体结合检测
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.10.11.755930v1?rss=1