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内容形式：摘要译文
模拟病毒聚合酶 X（mvPolX）是一种参与碱基切除修复（BER）的修复型聚合酶，在双链 DNA（dsDNA）中发挥缺口填补功能。我们展示了一种利用该聚合酶进行灵敏且具有序列特异性的 DNA 检测方法。mvPolX 从缺口的 3′ 端开始合成 DNA，并在不具备外切核酸酶活性的情况下置换下游核苷酸。本检测方法正是基于 mvPolX 的这一活性建立的。我们设计了一种探针分子，其由部分双链 DNA 构成，并带有与待检测靶 DNA 互补的 3′ 单链突出端。探针带有荧光基团—淬灭基团（FAM-BHQ1）标记，可在链被移除后实现检测。探针与互补靶序列结合后，会形成一段其中一条链含有单核苷酸缺口的双链 DNA。mvPolX 与该缺口区域结合并开始聚合，最终置换淬灭链，使荧光信号增强。
我们使用一段人工合成的 19 bp 靶 DNA 序列验证了该方法的可行性。该方法具有特异性：当靶 DNA 的 3′ 端存在一个或两个错配核苷酸时，均未观察到链置换。为展示该分子检测方法，我们以 M13 噬菌体为靶标。通过不对称 PCR（aPCR）从 M13 基因组 DNA 中获得 158 个碱基的单链靶 DNA，并直接将其用于检测。aPCR 与 mvPolX 检测法相结合，可检测低至 10 拷贝的基因组 DNA。该酶促反应速度快，仅需在 30°C 下与 mvPolX 孵育 15 min。我们还通过从掺入 M13 噬菌体的湖水样品中检测靶 DNA，进一步证明了该检测方法在存在多种非靶 DNA 时仍具有良好效能。
关键词：链置换聚合酶 · DNA 分子检测 · 序列特异性检测 · 碱基切除修复 · 荧光探针 · 不对称PCR
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.10.731134v1?rss=1