主动核穿梭借助即用型脂质纳米颗粒实现高效无病毒CAR基因整合

内容形式：摘要译文

嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞的非病毒工程化改造对于克服病毒载体和电穿孔所带来的成本、安全性及可扩展性限制具有重要意义。然而，在原代人T细胞中实现DNA的高效核内递送和稳定基因组整合仍是主要挑战。在此，我们建立了一种基于脂质纳米颗粒（LNP）结合核定位信号（NLS）穿梭策略的无病毒CAR-T细胞制备平台。我们开发了具有自主知识产权的即用型LNP，可实现对核酸的按需封装。为克服核转运屏障，我们采用NLS融合的转座酶或基因组编辑核酸酶在细胞质中结合供体DNA，并促进其主动进入细胞核。该方法能够将mRNA和质粒DNA高效且低毒性地递送至原代人T细胞中。NLS辅助的转座酶递送显著增强了CAR基因的基因组整合，与基于电穿孔的方法相比，实现了更高水平的表达和更好的细胞存活率。此外，在LNP递送后，通过基于末端连接的修复通路可更高效地实现TRAC基因座特异性靶向整合，而通过同源定向修复实现的效率相对较低。由此获得的工程化CAR-T细胞表现出强效且抗原特异性的细胞毒活性。综上，这些结果表明，NLS辅助的LNP递送克服了非病毒基因整合中的关键瓶颈，为制备具有功能性的CAR-T细胞提供了一种稳健的策略。

关键词：CAR-T细胞 · 脂质纳米颗粒 · 核定位信号 · 无病毒基因递送 · 基因组整合 · TRAC基因座靶向

原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.05.29.728914v1?rss=1