- 1次围观
背景：细胞学标本可通过微创方式进行重复取样，用于诊断和分子检测。然而，细胞学标本库的保存方案主要针对形态学观察进行优化，而前分析处理和储存对细胞内蛋白质的影响仍不明确。目的：评估固定、染色、储存温度及储存时间对细胞学标本中细胞内蛋白质保存的影响，并确定适用于原位邻位连接分析（in situ proximity ligation assay，isPLA）的条件。研究设计：将人源癌细胞系按照不同的前分析条件进行处理。采用原位邻位连接分析、荧光显微镜和定量图像分析评估细胞内蛋白质及蛋白质相互作用。载玻片分别在室温或−20℃条件下储存，并设置是否进行May-Grünwald-Giemsa（MGG）染色的情况。结果：储存温度对蛋白质信号的影响最大。未经染色且在−20℃储存的载玻片可在长达24个月内保持较强信号，而室温储存使可检测到的蛋白质相互作用减少约95%。MGG染色会进一步降低长期储存期间的信号强度。尽管如此，只要在同一天内完成染色、显微镜评估、脱色和抗体标记，染色后的载玻片仍适用于isPLA。染色载玻片在室温下长期储存会导致抗原性丧失、自发荧光增强，并产生假阴性结果。结论：低温储存和标准化的前分析处理能够 պահպան细胞学标本中的细胞内蛋白质信号。这些条件有助于对存档样本进行可靠的单细胞蛋白质谱分析，并支持其在生物标志物研究和转化病理学中的应用。
背景：细胞学标本可通过微创方式进行重复取样，用于诊断和分子检测。然而，细胞学样本库的保存方案主要针对形态学观察进行优化，而前分析处理和储存对细胞内蛋白质的影响仍不明确。
目的：评估固定、染色、储存温度及储存时间对细胞学标本中细胞内蛋白质保存的影响，并确定适用于原位邻近连接分析（in situ proximity ligation assay，isPLA）的条件。
研究设计：将人类癌细胞系按照不同的前分析条件进行处理。采用原位邻近连接分析、荧光显微镜和定量图像分析评估细胞内蛋白质及蛋白质—蛋白质相互作用。载玻片分别在室温或−20 ℃条件下储存，并设置是否进行May-Grünwald-Giemsa（MGG）染色的对照。
结果：储存温度对蛋白质信号的影响最大。未染色载玻片在−20 ℃下储存最长达24个月仍可保持强信号，而室温储存使可检测到的蛋白质相互作用减少约95%。在长期储存期间，MGG染色进一步降低了信号强度。然而，当染色、显微镜观察、脱色和抗体标记均在同一天完成时，已染色载玻片仍适用于isPLA。已染色载玻片在室温下长期储存会导致抗原性丧失、自发荧光增强以及假阴性结果。
结论：低温储存和标准化的前分析处理能够 պահպան细胞学标本中的细胞内蛋白质信号。这些条件有助于对存档样本进行可靠的单细胞蛋白质分析，并支持其在生物标志物研究和转化病理学中的应用。
作者声明不存在任何利益冲突。
感谢您有兴趣传播有关 bioRxiv 的信息。
注意：我们要求提供您的电子邮件地址，仅用于确认您是本文的发送者。
关键词：细胞内蛋白质相互作用 · 原位邻近连接分析 · 细胞学标本保存 · 前分析变量 · 蛋白质信号稳定性
原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.10.06.757074v1?rss=1