最小功能性 ZDHHC5 对 NOD2 结合和 S-酰化提出了不同要求

ZDHHC5介导的蛋白质S-酰基化促进先天免疫受体NOD1和NOD2募集至细胞膜。ZDHHC5含有一段延伸的胞质尾部，该结构域被认为参与底物招募、辅助蛋白相互作用及酶转运，但其对NOD1和NOD2修饰的贡献仍不明确。在本研究中，我们通过对ZDHHC5进行诱变，并在ZDHHC5敲除细胞中进行回补，确定了NOD结合、S-酰基化及质膜定位所需的区域。将尾部中三个发生S-酰基化的半胱氨酸替换后，ZDHHC5的定位及其恢复NOD2膜募集的能力均得以保留。逐步截短分析显示，大部分胞质尾部并非必需；由第1至第230位氨基酸组成的构建体仍保留了对NOD1和NOD2的活性。进一步截短至第1至第218位氨基酸后，NOD的S-酰基化和膜募集均受到损害，但并未消除与NOD2的结合。因此，底物结合与有效修饰具有不同的要求。C端尾部的去除还差异性地影响了辅助蛋白的结合：全长ZDHHC5可与GOLGA7A和GOLGA7B共同免疫沉淀，而仅有GOLGA7B能够被检测到与1-230构建体结合。综上，这些发现界定了一种能够支持NOD S-酰基化的ZDHHC5最小功能结构，并区分了底物结合、催化活性及辅助蛋白相互作用各自所需的条件。研究表明，在所检测的条件下，延伸的尾部对于NOD修饰并非必需，同时揭示了GOLGA7A和GOLGA7B与ZDHHC5结合的差异性要求。

ZDHHC5介导的蛋白质S-酰化促进先天免疫受体NOD1和NOD2向膜募集。ZDHHC5含有一段延伸的胞质尾部，该尾部被认为参与底物募集、辅助蛋白相互作用以及酶的转运，但其对NOD1和NOD2修饰的贡献仍不明确。在本研究中，我们通过对ZDHHC5进行突变，并在ZDHHC5敲除细胞中进行回补，确定了NOD结合、S-酰化和质膜定位所需的区域。将尾部中3个发生S-酰化的半胱氨酸替换后，ZDHHC5的定位及其恢复NOD2膜募集的能力均得以保留。逐步截短分析显示，大部分胞质尾部并非必需；由第1—230位氨基酸组成的构建体仍保留了对NOD1和NOD2的活性。进一步截短至第1—218位氨基酸则会损害NOD的S-酰化和膜募集，但并不会消除与NOD2的结合。因此，底物结合与有效修饰具有不同的要求。去除C端尾部还对辅助蛋白结合产生了差异性影响：全长ZDHHC5可与GOLGA7A和GOLGA7B共同免疫沉淀，而仅有GOLGA7B能够被检测到与1—230构建体发生结合。综上，这些发现界定了一种支持NOD S-酰化的ZDHHC5最小功能结构，并区分了底物结合、催化活性以及辅助蛋白相互作用各自的要求。研究结果表明，在所考察的条件下，延伸的尾部对于NOD修饰并非必需；同时，研究还揭示了GOLGA7A和GOLGA7B与ZDHHC5结合的差异性要求。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.30.755683v1?rss=1

🏷️ ZDHHC5 NOD2 S-酰化 先天免疫 蛋白质膜定位 GOLGA7辅助蛋白