针对呼吸道细胞中干扰素刺激基因的敲除筛选平台鉴定出LY6E是抵御冠状病毒的主要抗病毒效应因子

人冠状病毒（HCoVs）可引发从轻症到严重呼吸道疾病不等的病理结局。确定呼吸道细胞如何协调早期抗病毒反应，对于理解其成功控制HCoV复制的机制至关重要。I型干扰素（IFN）反应是先天性抗病毒免疫的重要组成部分。IFN信号传导可诱导数百种干扰素刺激基因（ISGs）上调，这些基因可能具有抗病毒活性；然而，在呼吸道上皮中负责限制低致病性HCoV的具体ISG尚未明确。在本研究中，我们开发了一种靶向CRISPR-Cas9敲除sgRNA文库（称为respISG文库），聚焦于在一组呼吸道细胞中均呈上调的ISG，用于筛选能够限制低致病性人冠状病毒HCoV-OC43的先天性宿主因子。我们在人永生化小气道上皮细胞中实施了基于细胞死亡的筛选，并鉴定出淋巴细胞抗原6E（LY6E）为主要候选因子之一。随后，我们在验证实验中证实了LY6E的活性，并发现其能够调控多种SARS-CoV-2刺突蛋白假型慢病毒的进入。除证明LY6E在小气道上皮细胞中阻断多种HCoV方面发挥关键作用外，本研究还建立了一种基于功能缺失型CRISPR-Cas9筛选的平台，用于鉴定呼吸道细胞中的HCoV抗病毒ISG。

人冠状病毒（HCoV）可引发从轻微疾病到严重呼吸系统疾病不等的致病性结局。明确呼吸道细胞如何协调早期抗病毒反应，对于理解机体如何有效控制HCoV复制至关重要。I型干扰素（IFN）反应是先天性抗病毒免疫的重要组成部分。IFN信号传导可导致数百种干扰素刺激基因（ISGs）上调，这些基因可能具有抗病毒活性；然而，在呼吸道上皮中负责限制低致病性HCoV的具体ISG尚不明确。在本研究中，我们开发了一个靶向性CRISPR-Cas9敲除sgRNA文库（称为respISG文库），重点针对一组呼吸道细胞中共同上调的ISG，以筛选能够限制低致病性人冠状病毒HCoV-OC43的先天性宿主因子。我们在人永生化小气道上皮细胞中开展了基于细胞死亡的筛选，并鉴定出淋巴细胞抗原6E（LY6E）这一首要候选基因。通过验证性研究，我们确认了LY6E的活性，并发现其能够调控多种携带SARS-CoV-2刺突蛋白的假型慢病毒的进入。除证明LY6E在小气道上皮细胞中阻断多种HCoV方面发挥关键作用外，本研究还建立了一个功能缺失型CRISPR-Cas9筛选平台，用于鉴定呼吸道细胞中的HCoV抗病毒ISG。

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🏷️ 干扰素刺激基因 CRISPR-Cas9筛选 LY6E抗病毒因子 冠状病毒感染 呼吸道上皮细胞