RNA自缔合限制了通过亲和层析去除双链RNA

双链RNA是单链RNA体外转录过程中产生的具有炎症性的副产物。本研究采用双链RNA亲和层析（dsRNA-AC）去除dsRNA副产物，并选用两种生物物理性质截然不同的mRNA分子进行研究：1）GFP；2）高dsRNA含量的野生型萤火虫荧光素酶（fLucWT）。对于GFP mRNA，dsRNA去除效果显著，且mRNA回收率较高。相比之下，fLucWT的dsRNA去除效率较低，mRNA产量也较低。生物物理学表征显示，fLucWT含有多分散的高级结构（HOS），在mRNA浓度为0.5 mg/ml时会干扰dsRNA-AC。降低fLucWT浓度可恢复dsRNA-AC的有效性。研究采用ELISA、点杂交、免疫印迹-核酸杂交以及基于细胞的干扰素释放检测法测定dsRNA水平，从而实现对这些分析方法的比较与交叉验证。dsRNA-AC是一种新型层析模式，本研究表明，样品的多分散性是决定dsRNA高效去除的关键因素。

双链RNA是单链RNA体外转录过程中产生的炎性副产物。本研究采用双链RNA亲和层析（dsRNA-AC）去除dsRNA副产物，并选用两种生物物理性质截然不同的mRNA分子进行研究：1）GFP；2）含有高水平dsRNA的野生型萤火虫荧光素酶（fLucWT）。对于GFP mRNA，dsRNA去除效果显著，且mRNA回收率较高。相比之下，fLucWT的dsRNA去除效率较低，mRNA产量也较低。生物物理学表征显示，fLucWT含有多分散的高阶结构（HOS），在mRNA浓度为0.5 mg/ml时会干扰dsRNA-AC。降低fLucWT浓度后，dsRNA-AC的有效性得以恢复。研究采用ELISA、点杂交、免疫Northern印迹以及基于细胞的干扰素释放检测测定dsRNA水平，从而实现了对这些分析方法的比较与交叉验证。dsRNA-AC是一种新型层析模式，本研究表明，样品的多分散性是决定dsRNA高效去除的关键因素。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.21.749193v1?rss=1

🏷️ 双链RNA去除 亲和层析 mRNA纯化 RNA自缔合 多分散高级结构 体外转录