光合真核生物中TIGR-Tas活性的首个证据|北京沫之东生物技术有限公司

2 次围观

TIGR--Tas系统是近期报道的一类由RNA引导的DNA靶向系统，其活性已在细菌和人细胞中得到证实，但尚未在光合真核生物中得到验证。在本研究中，我们在绿藻莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中测试了TIGR--Tas。由体外转录的tigRNA组装而成的重组TaTas和ParTas能够以浓度依赖性方式切割靶DNA，并且在电穿孔处理的莱茵衣藻细胞中检测到了TaTas蛋白。对内源性MAA7位点进行靶向深度测序后发现，在ParTas处理的细胞中检测到含有indel的测序读段，而野生型对照中未发现此类读段，其中包括一个1 bp缺失，其位置与此前报道的ParTas相关切割位点一致。将一种双链非同源寡核苷酸（dsNHO）与上述蛋白共同递送，可提高两种蛋白处理样品中含有indel的测序读段的检出率；该dsNHO由24 bp双链区和8 nt的3'突出端组成，其设计旨在匹配TasR家族核酸酶产生的错位末端。这些事件的发生频率非常低，因此现有数据尚不足以证明TIGR--Tas是适用于该宿主的高效基因组编辑系统。尽管如此，本研究仍为TIGR--Tas能够作用于光合真核生物核基因组提供了初步证据，并表明，借助dsNHO促进序列改变的恢复并不局限于传统的CRISPR--Cas核酸酶。

eunyu.kim{at}dukekunshan.edu.cn

摘要

信息/历史

指标

预览 PDF

摘要

TIGR—Tas 系统是近期描述的一类 RNA 引导的 DNA 靶向系统，其活性已在细菌细胞和人细胞中得到证实，但尚未在光合真核生物中得到验证。在本研究中，我们在绿藻莱茵衣藻（*Chlamydomonas reinhardtii*）中测试了 TIGR—Tas 系统。由体外转录的 tigRNA 组装而成的重组 TaTas 和 ParTas 能够以浓度依赖性方式切割靶 DNA；此外，在电穿孔处理后，也能在莱茵衣藻细胞中检测到 TaTas 蛋白。对内源性 MAA7 位点进行靶向深度测序后发现，ParTas 处理细胞中获得了含插入/缺失（indel）的测序读段，而野生型对照中未检测到此类读段，其中包括一个 1 bp 缺失，其位置与此前报道的 ParTas 相关切割位点一致。与蛋白共同递送一种双链非同源寡核苷酸（dsNHO）后，含有 24 bp 双链体和 8 nt 的 3′ 突出端；该寡核苷酸经设计可匹配 TasR 家族核酸酶产生的交错末端，从而提高了两种蛋白处理样品中含插入/缺失测序读段的检出率。这些事件的频率非常低，因此目前的数据尚不足以证明 TIGR—Tas 是一种适用于该宿主的高效基因组编辑系统。不过，这些结果初步表明，TIGR—Tas 能够作用于光合真核生物的核基因组，并且表明，借助 dsNHO 回收序列改变的策略并不局限于传统的 CRISPR—Cas 核酸酶。

利益冲突声明

已声明的资助信息

基础科学研究院（Institute for Basic Science），IBS-R021-D1-2026-a00

韩国国家研究基金会（National Research Foundation of Korea），RS-2024-00338015

国际科学家研究基金（Research Fund for International Scientists），KSSC202302072

中国国家自然科学基金委员会（National Natural Science Foundation of China），https://ror.org/01h0zpd94，KSSC202302072

中国昆山市科学技术局（Kunshan Science and Technology Bureau, China），KSSC202302072

版权

本预印本的。

本文依据 CC-BY 4.0 国际许可协议公开发布。

返回顶部

发布于 2026 年 9 月 16 日。

下载 PDF

电子邮件

感谢您有兴趣传播 bioRxiv 上的内容。

您的电子邮件地址

*

您的姓名

*

发送至

*

请输入多个地址，每行一个，或使用逗号分隔。

您将要发送的内容如下：