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刚地弓形虫在宿主来源的寄生泡（PV）内复制，而干扰素-γ（IFN-γ）可诱导靶向该区室的宿主限制因子。既往的CRISPR筛选鉴定出致密颗粒蛋白GRA66以及GRA57/GRA70/GRA71复合物，它们是寄生虫在IFN-γ刺激的人细胞中维持适应性所必需的，但它们所拮抗的宿主通路尚不明确。在本研究中，我们发现，GRA66是一种定位于寄生泡膜（PVM）的蛋白，预测其为可水解N-酰基磷脂酰乙醇胺（NAPE）的磷脂酶D；该蛋白对于阻止宿主磷脂酶和酰基转移酶RARRES3驱动的寄生虫提前逸出至关重要。GRA66缺失导致寄生虫提前逸出、宿主细胞死亡，并且在人细胞中的复制能力受损。在缺失RNF213的人细胞中，这些表型依然存在；RNF213是在人细胞中主导IFN-γ依赖性弓形虫限制作用的E3泛素连接酶。此外，与野生型相比，Δgra66寄生泡招募的RNF213和泛素更少，这表明该机制与RNF213无关，而非RNF213反应增强所致。利用GRA66锌结合基序催化位点突变体进行互补，未能恢复上述任何表型，说明其预测的酶活性是必需的。敲除RARRES3可挽救Δgra66和催化位点突变体寄生虫的提前逸出，但不能挽救Δgra70寄生虫的该表型；与此同时，复制缺陷仍然存在，揭示出GRA66缺失所导致的第二种、与RARRES3无关的后果。IFN-γ刺激后，RARRES3被招募至寄生泡膜和泡内网络；结构建模结果支持将GRA66归入NAPE-磷脂酶D家族，并表明其二锌活性位点保持完整。这些发现界定了人细胞自主免疫中一种以脂质为核心、独立于RNF213的作用分支，并鉴定出了抵御该免疫机制所必需的寄生虫效应蛋白。
弓形虫在宿主来源的寄生泡（parasitophorous vacuole，PV）内进行复制，而干扰素-γ（IFN-γ）可诱导靶向该区室的宿主限制因子。既往CRISPR筛选鉴定出致密颗粒蛋白GRA66以及GRA57/GRA70/GRA71复合物，它们对于寄生虫在人IFN-γ刺激细胞中的适合度是必需的，但其所拮抗的宿主通路尚不明确。本研究表明，GRA66是一种与PV膜（PVM）相关的蛋白，预测其为可水解N-酰基磷脂酰乙醇胺（NAPE）的磷脂酶D；该蛋白可阻止由宿主磷脂酶和酰基转移酶RARRES3驱动的过早逸出。GRA66缺失导致寄生虫过早逸出、宿主细胞死亡，并损害其在人细胞中的复制。这些表型在缺失RNF213的细胞中仍然存在；RNF213是在人细胞中主导IFN-γ依赖性弓形虫限制作用的E3泛素连接酶。此外，与野生型相比，Δgra66液泡募集的RNF213和泛素较少，表明这是一种独立于RNF213的机制，而非增强的RNF213应答。使用GRA66锌结合基序催化位点突变体进行互补，未能恢复上述任何表型，说明其预测的酶活性是必需的。敲除RARRES3可挽救Δgra66寄生虫和催化位点突变体寄生虫的过早逸出，但不能挽救Δgra70寄生虫的过早逸出；而复制缺陷仍然存在，揭示了GRA66缺失所导致的第二种、独立于RARRES3的后果。IFN-γ刺激后，RARRES3被募集至PVM和液泡内网络；结构建模进一步支持将GRA66归类于NAPE-磷脂酶D家族，且其双锌活性位点保持完整。这些发现界定了人类细胞自主性免疫中一种以脂质为核心、独立于RNF213的分支，并确定了抵御该免疫机制所必需的寄生虫效应蛋白。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.12.751112v1?rss=1
🏷️ 刚地弓形虫 GRA66效应蛋白 RARRES3磷脂酶 寄生泡膜 宿主细胞自主免疫 IFN-γ限制机制