pTRIP：一种用于单核细胞增生李斯特菌的新型整合质粒

过去几十年间，研究人员开发了多种用于对人类病原体单核细胞增生李斯特菌（*Listeria monocytogenes*）进行遗传修饰的工具。在本研究中，我们构建了一种名为 pTRIP（treB 插入质粒，treB insertion plasmid）的新型整合质粒系统，用于* L. monocytogenes*。pTRIP 是一种能够稳定整合至野生型 EGD-e 菌株 *treB* 位点的载体。该位点编码磷酸转移酶系统中唯一的海藻糖特异性 EIIB 和 EIIC 组分。成功整合将导致 *treB* 基因被破坏，从而使所得的* L. monocytogenes* 菌株无法以海藻糖作为唯一碳源生长。由于该整合通过双重同源重组实现，pTRIP 是首个不需要抗生素选择压力的整合系统。 为评估 pTRIP 系统的功能，我们将 *prfA* 及其天然启动子区域整合至 Δ*prfA* 菌株的 *treB* 位点。经证实，78%的分离克隆实现了互补，表明 *prfA* 成功整合至 *treB* 位点。随后，我们进一步构建了携带组成型 Pp60 启动子（pTRIP1）和诱导型 Prha 启动子（pTRIP2）的 pTRIP 衍生载体，以拓展其应用范围。显微镜分析证实了这两种启动子构建体的功能，并显示 Prha 启动子具有剂量依赖性诱导特征。pTRIP 是一种用于稳定基因表达和功能研究的高效工具，拓展了对* L. monocytogenes* 进行遗传修饰的可能性。

过去几十年间，研究人员已开发出多种用于遗传改造人类病原体单核细胞增生李斯特菌（*Listeria monocytogenes*）的工具。在此，我们构建了一种名为 pTRIP（treB 插入质粒，treB insertion plasmid）的新型整合质粒系统，用于*单核细胞增生李斯特菌*的遗传改造。pTRIP 是一种能够稳定整合至野生型 EGD-e 菌株 treB 位点的载体。该位点编码磷酸转移酶系统中唯一的海藻糖特异性 EIIB 和 EIIC 组分。成功整合将导致 treB 基因被破坏，从而使所得*单核细胞增生李斯特菌*菌株无法以海藻糖作为唯一碳源生长。由于该整合通过双重同源重组实现，pTRIP 是首个不需要抗生素筛选压力的整合系统。

为评估 pTRIP 系统的功能，我们将 prfA 及其天然启动子区域整合至 ΔprfA 菌株的 treB 位点。对所分离克隆的分析显示，78% 的克隆实现了功能互补，表明 prfA 已成功整合至 treB 位点。随后，我们进一步构建了携带组成型启动子 Pp60（pTRIP1）和诱导型启动子 Prha（pTRIP2）的 pTRIP 衍生质粒，以拓展其应用范围。显微镜分析证实了两种启动子构建体的功能，并显示 Prha 可实现剂量依赖性诱导。pTRIP 是一种用于稳定基因表达和功能研究的高效工具，拓展了*单核细胞增生李斯特菌*的遗传改造可能性。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.11.750939v1?rss=1

🏷️ 单核细胞增生李斯特菌 整合质粒 基因组整合 双重同源重组 基因表达调控