人NHE1以高亲和力结合全长钙调蛋白磷酸酶并抑制底物去磷酸化

钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶（calcineurin，Cn）通过其钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶结合结构域（NHE1-CnBD）与Na^+/H^+交换体NHE1相互作用。全长Cn的激活如何影响这种相互作用及其功能后果，尚不明确。在本研究中，我们采用荧光各向异性和定量尺寸排阻色谱法，定量分析了处于不同激活状态的全长人Cn与NHE1-CnBD之间的相互作用。Ca^2+/钙调蛋白激活使Cn对NHE1-CnBD的亲和力从亚微摩尔级提高至数十纳摩尔级，并稳定了该复合物。NHE1-CnBD在与Cn结合方面优于免疫抑制剂环孢素A/亲环蛋白A复合物，并选择性地抑制磷酸肽底物的去磷酸化，同时增强对对硝基苯磷酸酯的水解。这些发现表明，NHE1是一种高亲和力、与底物竞争的Cn调节因子，其通过阻断底物识别而非催化过程发挥作用，从而为Cn与NHE1之间的相互调控提供了机制框架。

钙调蛋白磷酸酶（Cn）通过其钙调蛋白磷酸酶结合结构域（NHE1-CnBD）与Na⁺/H⁺交换体NHE1相互作用。全长Cn的激活如何影响这种相互作用及其功能后果，尚不明确。在本研究中，我们采用荧光各向异性和定量体积排阻色谱，定量分析了处于不同激活状态的全长人Cn与NHE1-CnBD之间的相互作用。Ca²⁺/钙调蛋白激活使Cn对NHE1-CnBD的亲和力由亚微摩尔级提高至数十纳摩尔级，并稳定了该复合物。NHE1-CnBD在与Cn结合方面可竞争性地取代免疫抑制剂环孢素A/亲环蛋白A复合物，并选择性抑制磷酸肽底物的去磷酸化，同时增强对对硝基苯磷酸酯的水解。这些发现表明，NHE1是一种高亲和力、底物竞争性的Cn调节因子，其作用是阻断底物识别而非催化过程，从而为Cn与NHE1之间的相互调控提供了机制性框架。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.10.750614v1?rss=1

🏷️ 钙调蛋白磷酸酶 NHE1 蛋白质相互作用 底物竞争抑制 去磷酸化调控