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原代人胎儿上皮类器官通常来源于终止妊娠后获得的组织样本。近期，我们证实，这些类器官也可以由在产前诊断和介入操作过程中分离获得的羊水细胞稳定生成。羊水来源类器官（amniotic fluid-derived organoids，AFOs）是极具潜力的胎儿肺上皮、肾脏和小肠组织模型，可规避获取原代胎儿组织所涉及的部分伦理和法律限制。尽管如此，由于缺乏用于类器官形成性羊水细胞生物样本库建设、培养和分发的标准化且易于获取的流程，该技术的广泛应用仍受到限制。为推动AFOs在科研和临床领域的更广泛应用，本研究考察了两种冷冻保存策略，以优化用于类器官衍生的羊水细胞复苏效果。在策略1中，先对具有活力的羊水细胞进行分选，再进行冷冻保存；在策略2中，先将未经分选的羊水样本冷冻保存，解冻后再对具有活力的羊水细胞进行分选。我们对5种市售、符合GMP要求的冷冻保存液（FM1–5）以及一种标准实验室级对照冷冻保存液（FM CT）进行了全面评估。我们从类器官形成效率、形态学特征、增殖能力、上皮细胞身份和组织类型等方面对AFOs进行了评估。结果表明，类器官形成性羊水细胞无论在分选前还是分选后均可成功进行冷冻保存。策略1具有更高的类器官形成效率；由冷冻保存细胞和新鲜细胞衍生的AFOs表现出相当的扩增潜力。最后，FM4使存活率下降最小或几乎不发生下降，是所测试冷冻保存液中效果最佳的GMP级冷冻保存液。综上，我们提出了两种可行的冷冻保存策略，可根据不同实验室条件进行调整，并确定了最佳的符合GMP要求的冷冻保存液，从而支持AFOs的安全分发和集中化处理，促进AFO技术的规模化应用与协作研究。
从冷冻保存的人羊水细胞中衍生原代胎儿上皮类器官。| bioRxiv
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从冷冻保存的人羊水细胞中衍生原代胎儿上皮类器官。
Giorgia D'Ariano，Gloria Ji Zhang，Giuseppe Cala，Giuseppe Matteo Carrino，Aeshna Agarwal，Alessandro Mariani，Michela Marinaro，Rodolphe Matias de Sousa，Gianluca Cenedese，Carlotta Camilli，Anna L David，Simon Eaton，Alessandro Filippo Pellegata，Marco Pellegrini，Paolo De Coppi，Mattia Francesco Maria Gerli
doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.07.749928
Giorgia D'Ariano 1 外科与介入科学系，伦敦大学学院，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Gloria Ji Zhang 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Giuseppe Cala 1 外科与介入科学系，伦敦大学学院，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
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Giuseppe Matteo Carrino 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Aeshna Agarwal 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Alessandro Mariani 3 “Giulio Natta”化学、材料与化学工程系，米兰理工大学，意大利米兰； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Michela Marinaro 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Rodolphe Matias de Sousa 2 干细胞与再生医学 വിഭാഗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Gianluca Cenedese 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Carlotta Camilli 4 管理创新、诊断与临床路径部门，Bambino Gesù 儿童医院，意大利罗马； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Anna L David 5 Elizabeth Garrett Anderson 女性健康研究所，伦敦大学学院，英国伦敦 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Simon Eaton 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Simon Eaton 的 ORCID 记录
Alessandro Filippo Pellegata 3 “Giulio Natta”化学、材料与化学工程系，米兰理工大学，意大利米兰； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Marco Pellegrini 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Paolo De Coppi 2 干细胞与再生医学 ವಿಭಾಗ，伦敦大学学院大奥蒙德街儿童健康研究所，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
Mattia Francesco Maria Gerli 1 外科与介入科学系，伦敦大学学院，英国伦敦； 在 Google Scholar 中查找该作者 在 PubMed 中查找该作者 在本网站搜索该作者
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通讯作者：
m.gerli{at}ucl.ac.uk
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原代人胎儿上皮类器官通常来源于妊娠终止后获取的组织样本。近期，我们已证明，这些类器官可以由在产前诊断及介入操作期间分离获得的羊水细胞稳定生成。羊水来源类器官（amniotic fluid-derived organoids，AFOs）是具有应用前景的胎儿肺、肾脏和小肠上皮组织模型，可规避获取原代胎儿组织所涉及的部分伦理和法律限制。尽管如此，由于缺乏用于类器官形成性羊水细胞的生物样本库建立、培养和分发的标准化且易于获取的流程，该技术尚未得到广泛应用。为推动 AFO 在研究和临床领域的更广泛应用，本研究考察了两种冷冻保存策略，以优化羊水细胞的回收并用于类器官衍生。在策略1中，在冷冻前对具有活力的羊水细胞进行分选；在策略2中，对未经分选的羊水进行冷冻，并在解冻后根据细胞活力对羊水细胞进行分选。我们对5种市售的、符合 GMP 要求的冷冻保存液（FM1–5）以及一种标准实验室级对照液（FM CT）进行了全面评估。我们从形成效率、形态学特征、增殖能力、上皮细胞特性和组织类型等方面对 AFO 进行了评价。结果表明，类器官形成性羊水细胞在分选前和分选后均可成功进行冷冻保存。策略1具有更高的类器官形成效率；由冷冻保存细胞和新鲜细胞衍生的 AFO 在扩增潜能方面表现相当。最后，FM4 对存活率的影响极小或无明显影响，是所测试冷冻保存液中效果最佳的 GMP 级冷冻保存液。综上，我们提出了两种可行的冷冻保存策略，可适应不同的实验室条件，并确定了最佳的 GMP 合规冷冻保存液，从而支持安全分发和集中处理，促进 AFO 技术的规模化应用及协作研究。
利益冲突声明
MFMG、PDC 和 GC 被列为专利 GB2305703.7“从胎儿液体中衍生原代类器官”的发明人。该专利由伦敦大学学院于2023年4月18日提交。
版权
本预印本的。
本内容依据
CC-BY 4.0 国际许可协议
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发布于2026年9月9日。
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Giorgia D'Ariano，Gloria Ji Zhang，Giuseppe Cala，Giuseppe Matteo Carrino，Aeshna Agarwal，Alessandro Mariani，Michela Marinaro，Rodolphe Matias de Sousa，Gianluca Cenedese，Carlotta Camilli，Anna L David，Simon Eaton，Alessandro Filippo Pellegata，Marco Pellegrini，Paolo De Coppi，Mattia Francesco Maria Gerli
bioRxiv 2026.09.07.749928； doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.07.749928
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从冷冻保存的人羊水细胞中衍生原代胎儿上皮类器官。
Giorgia D'Ariano，Gloria Ji Zhang，Giuseppe Cala，Giuseppe Matteo Carrino，Aeshna Agarwal，Alessandro Mariani，Michela Marinaro，Rodolphe Matias de Sousa，Gianluca Cenedese，Carlotta Camilli，Anna L David，Simon Eaton，Alessandro Filippo Pellegata，Marco Pellegrini，Paolo De Coppi，Mattia Francesco Maria Gerli
bioRxiv 2026.09.07.749928； doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.07.749928
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.07.749928v1?rss=1
🏷️ 羊水来源类器官 胎儿上皮类器官 细胞冷冻保存 类器官培养 产前诊断生物样本库