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日本脑炎病毒（JEV）是南亚和东亚地区人类及农业动物发生脑炎的主要病因之一。该病毒主要由库蚊属（Culex）蚊虫传播，其中以三带喙库蚊（Culex tritaeniorhynchus）最为重要。据报道，在菲律宾，JEV占临床脑膜炎和脑炎病例的7%至18%。因此，获取该国流行JEV毒株的最新且全面的数据，对于制定有效的防控策略至关重要。本研究旨在利用一步法逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）优化JEV检测方法。此外，对从拉古纳省11个城市和市镇采集的蚊虫样本中JEV的存在情况进行了评估，并依据形态学特征鉴定蚊虫媒介。结果表明，优化后的一步法RT-PCR检测方法能够在不同稀释度下成功检出JEV，检出限（LoD）为0.115 ng/L。该方法表现出100%的特异性，除JEV外，其他任何病毒均未观察到扩增。对阳性对照JEV SA14-14-2 RNA进行序列分析显示，其与NCBI数据库中JEV参考序列的相似性为96.96%至98.41%。在采集的5,522只雌蚊中，三带喙库蚊（Culex tritaeniorhynchus）和凝滞库蚊（Culex gelidus）为最常见的种类。Paete的3个巴朗盖（barangay）具有最高的蚊种多样性和最均匀的物种分布，而拉古纳省Siniloan镇的3种库蚊——三带喙库蚊、凝滞库蚊和褐斑库蚊（Culex fuscocephala）——的媒介密度最高。对189组混合蚊虫样本进行RT-PCR分析后，未检测到JEV遗传物质。本研究可能是首项调查菲律宾拉古纳省蚊虫样本中JEV存在情况的研究。这些发现有助于开展主动的JEV监测，增进对该病毒存在及分布情况的认识。研究结果强调了在高风险地区实施有针对性的预防和控制措施、降低JEV传播风险的重要性。
在菲律宾拉古纳省选定地区采集的蚊虫中检测日本脑炎病毒：采用优化的一步法 RT-PCR 方案 | bioRxiv
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# 在菲律宾拉古纳省选定地区采集的蚊虫中检测日本脑炎病毒：采用优化的一步法 RT-PCR 方案
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John Leonard Reyes Chan， Bernadette C Mendoza， Lucille C Villegas， Joseph S Masangkay， Loinda R Baldrias， 查看 ORCID 个人资料 Thaddeus M Carvajal， 查看 ORCID 个人资料 Kozo Watanabe
doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.03.749309
John Leonard Reyes Chan¹
¹ 热带医学研究所高级分子技术实验室；
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通讯作者：
chanjohnleonard{at}yahoo.com
Bernadette C Mendoza²
² 菲律宾大学洛斯巴尼奥斯分校文理学院生物科学研究所，菲律宾拉古纳省科莱奇市 4031；
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Lucille C Villegas²
² 菲律宾大学洛斯巴尼奥斯分校文理学院生物科学研究所，菲律宾拉古纳省科莱奇市 4031；
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Joseph S Masangkay³
³ 菲律宾大学洛斯巴尼奥斯分校兽医学院兽医临床科学系，菲律宾拉古纳省 4031；
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Loinda R Baldrias³
³ 菲律宾大学洛斯巴尼奥斯分校兽医学院兽医临床科学系，菲律宾拉古纳省 4031；
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Thaddeus M Carvajal⁴
⁴ 德拉萨大学理学院生物学系，菲律宾马尼拉 1004；
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Kozo Watanabe⁵
⁵ 日本爱媛大学土木与环境工程系，松山市，日本
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## 摘要
日本脑炎病毒是南亚和东亚地区人类及农业动物发生脑炎的主要病因之一。该病毒主要由库蚊属（*Culex*）蚊虫传播，其中以三带喙库蚊（*Culex tritaeniorhynchus*）最为显著。据报道，在菲律宾，日本脑炎病毒占临床脑膜炎和脑炎病例的 7% 至 18%。因此，获取该国流行日本脑炎病毒株的最新且全面的数据，对于制定有效的防控策略至关重要。本研究旨在优化一种采用一步法逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测日本脑炎病毒的检测方法。此外，本研究评估了从拉古纳省 11 个城市和市镇采集的蚊虫中日本脑炎病毒的存在情况，并根据形态学特征鉴定蚊虫携带者。
结果表明，优化后的一步法 RT-PCR 检测方法能够在不同稀释度下成功检测日本脑炎病毒，其检测限（LoD）为 0.115 ng/μL。该方法表现出 100% 的特异性，除日本脑炎病毒外，其他任何病毒均未观察到扩增。对阳性对照——日本脑炎病毒 SA14-14-2 RNA——的序列分析显示，其与美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库中日本脑炎病毒参考序列的相似性为 96.96% 至 98.41%。
在采集的 5,522 只雌蚊中，三带喙库蚊（*Culex tritaeniorhynchus*）和凝水型库蚊（*Culex gelidus*）为最常见的物种。在帕埃特的 3 个村（barangay）中，蚊种多样性最高且分布最均匀；但拉古纳省西尼洛安的 3 种库蚊——三带喙库蚊（*Culex tritaeniorhynchus*）、凝水型库蚊（*Culex gelidus*）和白额库蚊（*Culex fuscocephala*）——的媒介密度最高。对 189 份混合蚊虫样本进行 RT-PCR 分析后，未检测到日本脑炎病毒遗传物质。
本研究可能是首项调查菲律宾拉古纳省蚊虫样本中日本脑炎病毒存在情况的研究。这些发现有助于开展积极主动的日本脑炎病毒监测，并加深我们对该病毒存在状况及分布情况的认识。研究结果凸显了在高风险地区实施有针对性的预防和控制措施、降低日本脑炎病毒传播风险的重要性。
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本文依据以下许可协议公开发布：
CC-BY-ND 4.0 国际许可协议。
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发布于 2026 年 9 月 7 日。
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John Leonard Reyes Chan， Bernadette C Mendoza， Lucille C Villegas， Joseph S Masangkay， Loinda R Baldrias， Thaddeus M Carvajal， Kozo Watanabe
bioRxiv 2026.09.03.749309；
doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.03.749309
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John Leonard Reyes Chan， Bernadette C Mendoza， Lucille C Villegas， Joseph S Masangkay， Loinda R Baldrias， Thaddeus M Carvajal， Kozo Watanabe
bioRxiv 2026.09.03.749309；
doi： https://doi.org/10.64898/2026.09.03.749309
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.09.03.749309v1?rss=1
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