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富含GC的序列广泛存在于人类疱疹病毒基因组中。富含GC的区域能够形成一种称为R环的三链RNA-DNA杂合结构。尽管这些杂合结构在端粒处或细胞DNA合成过程中发挥着重要的生物学作用，但非计划性或持续性的R环形成会导致DNA损伤和基因组不稳定。因此，细胞中存在多种解析R环的机制，包括内切核糖核酸酶RNaseH1（组成型表达）和RNaseH2A（受细胞周期调控），二者均可降解R环中的RNA部分。卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的裂解复制起始点（OriLyt）包含多个病毒DNA复制所必需的顺式作用元件，其中包括富含GC且具有重复性的转录本T1.4（OriLyt-L）和kaposin（OriLyt-R）的产生。我们此前发现，两个OriLyt处均可形成R环；删除kaposin重复序列或降低其GC含量会阻止OriLyt-R处R环的形成，减少初次感染后的基因组扩增，并导致潜伏期建立缺陷。为明确R环在KSHV复制过程中所发挥的作用，我们过表达了RNaseH1，推测过量的RNaseH1能够解析两个OriLyt处的R环。然而，在iSLK和BCBL-1细胞系中，KSHV再激活后RNaseH1蛋白水平均有所下降。通过共转染实验，我们发现KSHV病毒复制与转录激活因子RTA以依赖其E3连接酶结构域的方式介导RNaseH1蛋白水平下降，但不影响其相应RNA转录本的水平。我们尝试通过对赖氨酸残基进行单独或联合定点诱变，构建一种能够抵抗RTA且具有功能的RNaseH1变体，但这些构建体仍易受RTA介导的蛋白水平下降影响。氨基端带有标签的RNaseH1对RTA的易感性降低，提示RTA可能靶向RNaseH1的N端并对其进行泛素化。然而，过表达受细胞周期调控的内切酶RNaseH2表现出对RTA的抵抗性，提示RNaseH2可能成为一种能够在KSHV感染期间有效解析R环的工具。KSHV并非唯一编码能够降低RNaseH1水平的蛋白的疱疹病毒，因为共表达来自相关γ-疱疹病毒EBV和MHV-68的RTA同源蛋白，同样会降低RNaseH1蛋白的稳态水平。我们提出，RTA介导的RNaseH1降解是一种在γ-疱疹病毒感染期间确保R环持续存在的保守策略，这进一步凸显了这些结构的重要性。
富含GC的序列广泛存在于人类疱疹病毒基因组中。富含GC的区域能够形成称为R环的三链RNA∶DNA杂合结构。尽管这些杂合结构在端粒处或细胞DNA合成过程中发挥重要的生物学作用，但非程序性或持续性的R环形成会导致DNA损伤和基因组不稳定。因此，细胞中存在多种解析R环的机制，其中包括内切核糖核酸酶RNaseH1（组成性表达）和RNaseH2A（受细胞周期调控），二者均可降解R环中的RNA部分。卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的裂解复制起点（OriLyts）含有多个病毒DNA复制所必需的顺式作用元件，包括富含GC且具有重复性的转录本T1.4（OriLyt-L）和kaposin（OriLyt-R）的产生。我们此前发现，两个OriLyt位点均可形成R环；而删除kaposin重复序列或降低其GC含量，则会阻止OriLyt-R处R环的形成，降低初次感染后的基因组扩增，并导致潜伏期建立缺陷。为明确R环在KSHV复制过程中所发挥的作用，我们过表达了RNaseH1，推测过量的RNaseH1将解析两个OriLyt处的R环。然而，在iSLK和BCBL-1两种细胞系中，KSHV再激活后RNaseH1蛋白水平均有所下降。通过共转染实验，我们发现KSHV病毒复制与转录激活蛋白RTA以依赖其E3连接酶结构域的方式介导RNaseH1蛋白水平下降，但不影响其相应RNA转录本的水平。我们尝试通过对赖氨酸残基进行逐一或联合定点突变，构建对RTA具有抗性且仍具功能的RNaseH1，但这些构建体仍易受RTA介导的蛋白水平下降影响。氨基端带标签的RNaseH1对RTA的易感性降低，这提示RTA可能靶向RNaseH1的N端并促使其发生泛素化。然而，过表达受细胞周期调控的内切酶RNaseH2则表现出对RTA的抗性，提示RNaseH2可能成为一种能够在KSHV感染期间有效解析R环的工具。KSHV并非唯一编码可降低RNaseH1水平蛋白质的疱疹病毒，因为共表达来自相关γ-疱疹病毒EBV和MHV-68的RTA同源蛋白，同样会降低RNaseH1蛋白的稳态水平。我们提出，RTA介导的RNaseH1降解是γ-疱疹病毒感染期间确保R环持续存在的一种保守策略，进一步凸显了这些结构的重要性。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.31.748444v1?rss=1
🏷️ 卡波西肉瘤相关疱疹病毒 R环 裂解复制起始点 RNaseH1降解 RTA介导泛素化 γ-疱疹病毒