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**背景** 克里米亚-刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus，CCHFV）是一种蜱媒纳罗病毒，可在流行地区引起严重的人类疾病，目前尚无广泛可用的获批抗病毒药物。由于研究真实CCHFV必须在生物安全防护水平4级（BSL-4）条件下进行，抗病毒药物的发现受到限制，因此亟需建立较低生物安全防护等级的研究平台。本研究评估了一种基于CCHFV糖蛋白的、符合BSL-2条件的假型水疱性口炎病毒（VSV）筛选流程，能否鉴定出具有抗真实CCHFV活性的小分子入侵抑制剂。 **方法** 采用携带CCHFV糖蛋白的复制缺陷型VSV假型病毒，对包含186种抗病毒化合物的化合物库进行筛选。随后，通过加药时序实验和CCHFV糖蛋白介导的细胞-细胞融合实验，对筛选出的化合物进行进一步表征，以评估其对病毒入侵的影响。在BSL-4条件下，利用表达ZsGreen1的真实重组CCHFV，通过基于荧光和基于病灶形成的检测方法，进一步评估筛选化合物的抗病毒活性。 **结果** BSL-2筛选鉴定出艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素能够抑制CCHFV糖蛋白介导的病毒入侵。两种化合物在病毒暴露期间及入侵早期阶段存在时，均表现出最强的抑制活性；同时，它们还能够降低CCHFV糖蛋白介导的细胞-细胞融合。重要的是，在BSL-4条件下，艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素同样能够抑制真实重组CCHFV；基于荧光和基于病灶形成的检测方法均独立证实了其抗病毒活性。 **结论** 本研究建立了一种实用的CCHFV入侵筛选流程，将BSL-2 VSV假型系统与BSL-4条件下的真实病毒验证相衔接。艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素的鉴定为进一步研究CCHFV入侵抑制提供了小分子候选物，也证明了该流程在CCHFV抗病毒药物发现中的应用价值。
**背景**
克里米亚—刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus，CCHFV）是一种蜱传播的内罗病毒属病毒，可在流行地区引发严重的人类疾病，目前尚无广泛可用的获批抗病毒药物。由于研究真正的CCHFV要求在生物安全防护水平4级（BSL-4）条件下进行，抗病毒药物的发现受到限制，因此亟需建立较低生物安全防护等级的平台。在本研究中，我们评估了一种基于CCHFV糖蛋白、可在BSL-2条件下开展的假型水疱性口炎病毒（VSV）筛选流程，探讨其能否鉴定出对真正CCHFV具有抗病毒活性的小分子入侵抑制剂。
**方法**
采用携带CCHFV糖蛋白的复制缺陷型VSV假型病毒，对包含186种抗病毒化合物的化合物库进行筛选。随后，通过加药时序实验以及CCHFV糖蛋白介导的细胞—细胞融合实验，对筛选获得的化合物进行进一步表征，以评估其对病毒入侵的影响。在BSL-4条件下，利用表达ZsGreen1的重组CCHFV，通过基于荧光和基于感染灶形成的检测方法，进一步评估所选化合物对真正重组CCHFV的抗病毒活性。
**结果**
BSL-2条件下的筛选鉴定出艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素可抑制CCHFV糖蛋白介导的入侵。两种化合物在病毒暴露期间及入侵早期阶段存在时，均表现出最强的抑制活性，并且还可降低CCHFV糖蛋白介导的细胞—细胞融合。重要的是，在BSL-4条件下，艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素同样能够抑制真正的重组CCHFV；基于荧光和感染灶形成的检测方法均独立证实了其抗病毒活性。
**结论**
本研究建立了一种实用的CCHFV入侵筛选流程，将BSL-2条件下的VSV假型系统与BSL-4条件下针对真正病毒的验证相连接。艾曲泊帕乙醇胺和槲皮素的鉴定为进一步研究CCHFV入侵抑制提供了小分子候选物，同时证明了该流程在CCHFV抗病毒药物发现中的实用价值。
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