基于活性的原代脑细胞分析鉴定出HCN通道的共价变构调节剂

化学蛋白质组学能够在天然生物系统中提供小分子—蛋白质相互作用的全局图谱。然而，这类配体可结合性图谱在很大程度上仍局限于易于获取的细胞系和原代免疫细胞。在此，我们描述了一种基于活性的蛋白质谱分析（ABPP）策略，用于绘制从小鼠分离的原代脑细胞中共价配体可结合性的图谱。通过研究一组具有明确立体化学构型的亲电性小分子（立体探针），我们鉴定出多种脑细胞蛋白的配体结合事件，其中包括许多在神经系统中富集表达的蛋白。在这一类别中，包括多个超极化激活的环核苷酸门控（HCN）离子通道；我们表明，色氨咯啉丙烯酰胺立体探针可在其环核苷酸结合结构域中一个保守半胱氨酸位点与这些通道发生共价配体结合。研究发现，这些立体探针能够阻断cAMP依赖性的电压依赖性位移，同时保留HCN通道的基础活性。因此，我们描述了一种先进的ABPP平台，用于鉴定以神经系统富集蛋白为靶标的配体，其中包括能够在细胞中调节HCN通道功能的化学探针。

化学蛋白质组学能够在天然生物系统中提供小分子—蛋白质相互作用的全局图谱。然而，此类可配体化图谱大多局限于易于获取的细胞系和原代免疫细胞。在此，我们描述了一种基于活性的蛋白质谱分析（ABPP）策略，用于绘制从小鼠分离的原代脑细胞的共价可配体化图谱。通过研究一组具有明确立体化学构型的亲电子小分子（立体探针），我们鉴定出多种脑细胞蛋白的配体结合事件，其中包括许多在神经系统中富集表达的蛋白质。在这一类别中，包括多个超极化激活的环核苷酸门控（HCN）离子通道；我们进一步表明，色氨啉丙烯酰胺立体探针可在其环核苷酸结合结构域中的一个保守半胱氨酸位点与这些通道发生共价配体结合。研究发现，这些立体探针能够阻断 cAMP 依赖性的电压依赖性位移，同时保留 HCN 通道的基础活性。因此，我们描述了一种先进的 ABPP 平台，可用于鉴定靶向神经系统富集蛋白的配体，其中包括能够在细胞中调节 HCN 通道功能的化学探针。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.25.747126v1?rss=1

🏷️ 活性基础蛋白质谱分析 化学蛋白质组学 原代脑细胞 HCN离子通道 共价变构调节剂