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背景：肿瘤坏死因子抑制剂，如英夫利昔单抗和阿达木单抗，已改变自身免疫性疾病的治疗格局；然而，英夫利昔单抗是一种鼠-人嵌合抗体，仍具有免疫原性，并伴有自聚集/聚集倾向，且需要长时间静脉给药。我们对英夫利昔单抗进行了人源化改造，并设计了源自英夫利昔单抗、具有更优效力和可开发性的候选分子。 方法：将英夫利昔单抗的互补决定区移植至人胚系框架上，生成了人源化英夫利昔单抗。采用STage-Enhanced Maturation（STEM）技术获得亲和力成熟克隆（hInBG4），随后在互补决定区中引入定点氨基酸替换，生成LW2Y、LW2YR2S和LW2YHR1K。通过细胞基础的肿瘤坏死因子α中和实验、亲和捕获自相互作用纳米粒子光谱分析、杆状病毒颗粒酶联免疫吸附测定、体积排阻高效液相色谱、在人胚肾293细胞中的瞬时表达，以及采用生物层干涉法测定肿瘤坏死因子α结合动力学（包括在pH 7.4和5.8条件下的解离）对各变体进行评估。 结果：三种变体的中和效力均较嵌合英夫利昔单抗提高2至3倍，并优于阿达木单抗。亲和捕获自相互作用纳米粒子光谱分析的位移由亲本分子的两位数水平降至个位数低水平，而杆状病毒颗粒结合比仍处于可接受范围。体积排阻色谱显示单体峰更为纯净，拖尾减少，且相较于人源化英夫利昔单抗表达量提高。LW2Y在pH 7.4条件下兼具极高亲和力，并在pH 5.8条件下表现出显著更快的解离，符合pH依赖性抗原释放特征。 结论：人源化、亲和力成熟及定向互补决定区再工程化成功生成了兼具更优效力和可开发性的英夫利昔单抗衍生候选分子，并确定LW2Y作为进一步临床前评价的先导分子。
背景：肿瘤坏死因子-抑制剂（如英夫利昔单抗和阿达木单抗）已改变了自身免疫性疾病的治疗方式；然而，英夫利昔单抗是一种鼠-人嵌合抗体，仍具有免疫原性，存在自聚集/聚集倾向，并且需要较长时间的静脉给药。我们对英夫利昔单抗进行了人源化，并工程化获得了具有更优效力和可开发性的英夫利昔单抗衍生候选分子。
方法：将英夫利昔单抗的互补决定区移植至人种系胚系框架上，构建人源化英夫利昔单抗。借助STage-Enhanced Maturation（STEM）技术获得亲和力成熟克隆（hInBG4），随后在互补决定区引入靶向氨基酸替换，生成LW2Y、LW2YR2S和LW2YHR1K。采用细胞基础的肿瘤坏死因子α中和实验、亲和捕获自相互作用纳米颗粒光谱法、杆状病毒颗粒酶联免疫吸附测定、体积排阻高效液相色谱、人胚肾293细胞瞬时表达，以及通过生物层干涉法测定肿瘤坏死因子α结合动力学（包括在pH 7.4和5.8条件下的解离）对各变体进行评估。
结果：三种变体的中和效力均较嵌合英夫利昔单抗提高2至3倍，并优于阿达木单抗。亲和捕获自相互作用纳米颗粒光谱法中的位移由亲本分子的两位数降至个位数低值，而杆状病毒颗粒结合比值仍处于可接受范围。体积排阻色谱显示单体峰更纯净、拖尾减少，且相较于人源化英夫利昔单抗其表达量升高。LW2Y在pH 7.4下兼具极高亲和力，并在pH 5.8下表现出显著更快的解离，符合pH依赖性抗原释放特征。
结论：通过人源化、亲和力成熟及靶向互补决定区再工程化，获得了具有更优效力和可开发性的英夫利昔单抗衍生候选分子，并确定LW2Y可作为进一步临床前评估的先导分子。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.18.745573v1?rss=1
🏷️ 人源化抗体 英夫利昔单抗 TNF-α中和 pH敏感性工程 抗体亲和力成熟 抗体可开发性