使用等位基因选择性qPCR定量分析UBQLN2 ALS/FTD成纤维细胞及iPSC模型中的X染色体失活

X 染色体基因 UBQLN2 中的致病性错义变异可导致肌萎缩侧索硬化症（ALS），且常伴发额颞叶痴呆（FTD）。作为一种 X 连锁基因，UBQLN2 受 X 染色体失活（XCI）调控；这一过程是指在女性体内，每个细胞中的一条 X 染色体在整个机体范围内随机失活并形成巴尔小体，从而在杂合子组织中产生等位基因表达的镶嵌状态。尽管携带 UBQLN2 相关 ALS/FTD 的已报告病例中，杂合女性占多数，且已知 XCI 对神经系统疾病具有广泛影响，但目前尚无疾病模型考虑 XCI 的作用。本文报道了对 12 个携带 ALS/FTD 致病性 p.T487I（c.1460C>T）UBQLN2 变异的 iPSC 克隆的表征。这些克隆最初来源于 3 条杂合携带者成纤维细胞系，并经验证保持了稳态巴尔小体。部分细胞系中 XCI 的削弱与双等位基因表达（同时表达野生型和突变型 UBQLN2）相关；该结果通过一种新的等位基因选择性 qPCR（AS-qPCR）检测获得测量，并经基于扩增子的 Illumina 测序及 Sanger 色谱图定量验证，从而能够筛选出最能保留 XCI 的 iPSC 克隆。综上，该 UBQLN2 AS-qPCR 检测及所筛选的 iPSC 克隆将有助于研究 XCI 及其偏倚在女性对 UBQLN2 p.T487I 相关 ALS/FTD 的耐受中的作用，并推动等位基因选择性治疗策略的发展。

X染色体基因 UBQLN2 中的致病性错义变异可导致肌萎缩侧索硬化症（ALS），且常伴有额颞叶痴呆（FTD）。作为一种 X 连锁基因，UBQLN2 受 X 染色体失活（XCI）调控；在这一过程中，女性体内每个细胞中的一条 X 染色体会在全身范围内随机失活并形成巴尔小体，从而在杂合子组织中产生等位基因表达的嵌合状态。尽管携带 UBQLN2 相关 ALS/FTD 的已报道病例中，杂合女性占多数，而且 XCI 已知会广泛影响神经系统疾病，但目前尚无任何疾病模型将 XCI 纳入考量。本文报道了对 12 个携带 ALS/FTD 致病性 p.T487I（c.1460C>T）UBQLN2 变异的 iPSC 克隆的表征。这些克隆最初来源于 3 条杂合携带者成纤维细胞系，并经验证保留了稳态巴尔小体。部分细胞系中 XCI 的衰减与双等位基因表达（即野生型和突变型 UBQLN2 的共同表达）相关；该结论通过一种新的等位基因选择性 qPCR（AS-qPCR）检测方法测得，并经基于扩增子的 Illumina 测序及 Sanger 色谱图定量加以验证，从而能够筛选出最能保持 XCI 的 iPSC 克隆。综上，这一 UBQLN2 AS-qPCR 检测方法及所选 iPSC 克隆将有助于研究 XCI 及其偏倚在女性对 UBQLN2 p.T487I 相关 ALS/FTD 的耐受性中的作用，并推动等位基因选择性治疗的发展。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.14.744950v1?rss=1

🏷️ X染色体失活 UBQLN2 ALS/FTD 等位基因选择性qPCR iPSC模型