用于原代人肝细胞的CRISPR-Cas9平台实现了HBV宿主因子的阵列筛选和体内验证

每年有超过两百万人死于肝脏相关疾病，这使原代人肝细胞（primary human hepatocytes，PHH）成为研究肝脏病理生理学及肝脏疾病潜在分子机制的极其宝贵的体外模型。然而，由于PHH在培养条件下不发生增殖，CRISPR基因编辑的效率一直很低。在此，我们报道了在小鼠传代原代人肝细胞（mouse-passaged primary human hepatocytes，mpPHH）中通过脂质体转染和慢病毒介导递送CRISPR-Cas9的实验方案；该体系可使PHH在肝脏人源化小鼠中实现扩增。我们在保持细胞活力的同时，在mpPHH中实现了超过90%的高效稳健基因编辑。 我们通过敲除CYP3A4以削弱外源性化合物代谢能力，并通过证明经编辑的mpPHH能够在小鼠体内高效植入并扩增、从而生成人源化肝脏动物，展示了这些方案的应用价值。我们利用一项涵盖85个基因的筛选，建立了在mpPHH中开展阵列式CRISPR筛选以鉴定影响乙型肝炎病毒（HBV）感染宿主因子的可行性，并通过靶向HBV入侵受体SLC10A1（NTCP）在人体化小鼠中验证了关键发现；该操作降低了体内病毒感染。我们的方法学实现了对mpPHH可规模化的遗传操作，为HBV研究和肝病模型构建开辟了新途径。

每年有超过两百万人死于肝脏相关疾病，这使得原代人肝细胞（PHH）成为研究肝脏病理生理过程及肝脏疾病分子机制的宝贵体外模型。然而，由于PHH在培养条件下不增殖，CRISPR基因编辑的效率一直很低。在此，我们报道了通过脂质体转染和慢病毒介导向小鼠传代原代人肝细胞（mpPHH）递送CRISPR-Cas9的实验方案；该体系可使PHH在肝人源化小鼠体内扩增。我们在保持细胞活力的同时，在mpPHH中实现了超过90%的稳健基因编辑效率。

我们通过破坏CYP3A4来削弱外源性化合物代谢，并证明了这些实验方案的实用性；同时，我们还表明，经编辑的mpPHH能够在小鼠体内高效植入并扩增，从而生成肝人源化动物。我们利用一项针对85个基因的筛选，在mpPHH中建立了阵列式CRISPR筛选的可行性，以鉴定影响乙型肝炎病毒（HBV）感染的宿主因子；并通过靶向HBV入侵受体SLC10A1（NTCP），在肝人源化小鼠中验证了关键发现，该操作在体内降低了病毒感染。我们的方法学实现了对mpPHH进行可规模化遗传操控，为HBV研究和肝脏疾病建模开辟了新途径。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.10.743996v1?rss=1

🏷️ 原代人肝细胞 CRISPR-Cas9 HBV宿主因子 阵列筛选 人源化小鼠 SLC10A1/NTCP