聚焦框架采样可在单轮分选中恢复具有结合活性的抗淀粉样蛋白β人源化抗体

治疗性抗体开发需要将抗原反应性克隆发现、高效人源化以及早期可开发性评估相结合的工作流程。在此，我们将免疫酵母片段抗原结合区（Fab）展示与单轮聚焦人源化相结合，并将该工作流程应用于针对源自淀粉样蛋白β（Abeta）制备物的抗体开发。 以Abeta1-42聚集体制备物进行免疫后，构建得到一个多样性约为3.5 × 10^8的Fab展示文库。经磁性富集并结合荧光激活细胞分选（FACS）后，鉴定出3个序列不同的免疫球蛋白G（IgG）格式候选分子，其中CLAB17和CLAB45被进一步推进至人源化。结构指导的人源化文库对预测可支持互补决定区（CDRs）或重链、轻链可变结构域堆积的框架区位点进行了采样，经过单轮FACS筛选后，获得了保持结合阳性的变体CLAB17-h2和CLAB45-h8。二者均保留了亲本CDRs，并表现出更高的预测人源性、有利的计算可开发性初筛特征，以及在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中显示的高纯度。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）发现，CLAB17-h2对Abeta1-42 AggreSure表现出更低的表观半数最大有效浓度（EC50），而CLAB45-h8对焦谷氨酸修饰的Abeta3-42（AbetapE3-42）表现出更低的表观EC50。由于这些制备物未被解析为明确界定的组装状态，因此这些抗体应被视为与Abeta制备物结合的候选分子，而非聚集状态选择性候选分子。 该工作流程为从免疫库发现到获得保持结合阳性的人源化抗体提供了一条切实可行的路径。

治疗性抗体开发需要将抗原反应性克隆发现、有效的人源化以及早期可开发性评估相整合的工作流程。在此，我们将免疫酵母抗原结合片段（Fab）展示与单轮聚焦人源化相结合，并将该流程应用于针对淀粉样蛋白β（Abeta）衍生制备物的抗体。

使用Abeta1-42聚集体制备物进行免疫后，构建了一个多样性约为3.5 × 10^8的Fab展示文库。经磁性富集后再通过荧光激活细胞分选（FACS），鉴定出3个序列各异的免疫球蛋白G（IgG）格式候选分子，其中CLAB17和CLAB45被推进至人源化阶段。结构指导型文库对预测可支持互补决定区（CDRs）或重链与轻链可变结构域堆积的框架区位点进行了采样，并通过单轮FACS回收获得了保持结合阳性的变体CLAB17-h2和CLAB45-h8。两者均保留了亲本CDRs，显示出更高的预测人源性、良好的计算可开发性初筛特征，并在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中表现出较高纯度。通过酶联免疫吸附测定（ELISA），CLAB17-h2对Abeta1-42 AggreSure表现出更低的表观半数最大有效浓度（EC50），而CLAB45-h8对焦谷氨酸修饰的Abeta3-42（AbetapE3-42）表现出更低的表观EC50。由于这些制备物未被解析为明确的组装状态，因此这些抗体应被视为与Abeta制备物结合的候选分子，而非聚集状态选择性候选分子。

该工作流程为从免疫库发现到获得保持结合阳性的人源化抗体提供了一条切实可行的路径。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.14.744767v1?rss=1

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