用于人肾活检高维单细胞空间分析的连续免疫组织化学技术

背景：采用显色检测的传统免疫组织化学（IHC）多重检测能力有限，每张组织切片同时最多只能检测4种蛋白标志物，因此限制了对珍贵人类活检样本进行全面空间分析的能力。我们开发并验证了一种稳健的连续免疫组织化学（sIHC）染色方法，可在单张肾活检切片上检测多种抗原，从而最大化复杂肾脏疾病诊断与研究中的数据产出。 方法：将福尔马林固定、石蜡包埋的肾活检切片进行重复的IHC/成像循环，并采用优化的十二烷基硫酸钠-甘油缓冲液剥离方案去除抗体。随后对图像进行共配准，并采用包括颜色去卷积、细胞分割和空间聚类在内的多种方法开展分析。 结果：该优化的sIHC方法可在单张切片上成功检测多达20种抗原。结合图像分析和人工智能软件，例如HALO（Indica Labs），该检测方法能够组装高维图像，并实现定量组织学分析和单细胞空间分析。利用这一先进方法，我们能够识别罕见细胞群体，例如传统方法难以检测的双阴性T细胞。 结论：我们开发了一种经验证的高容量sIHC方案，该方案采用标准IHC流程以及商业可得、经临床验证的现成抗体。该方法是一种有价值且具有成本效益的工具，可从有限的病理样本（如人肾活检）中获取广泛的、高维度的、单细胞分辨率的空间数据。

背景：采用显色检测的传统免疫组织化学（IHC）多重检测能力有限，在每张组织切片上同时最多只能检测4种蛋白标志物，因此限制了对珍贵人体活检样本进行全面空间分析的能力。我们开发并验证了一种稳健的连续免疫组织化学（sIHC）染色方法，可在单张肾活检切片上检测多种抗原，从而最大化复杂肾脏疾病诊断与研究的数据产出。

方法：将福尔马林固定、石蜡包埋的肾活检切片进行重复的IHC/成像循环，并采用优化的十二烷基硫酸钠-甘油缓冲液剥离方案去除抗体。随后对图像进行共配准，并采用多种方法进行分析，包括颜色去卷积、细胞分割和空间聚类。

结果：该优化的sIHC方法可在单张切片上成功检测多达20种抗原。结合图像分析和人工智能软件，例如HALO（Indica Labs），该检测方法能够构建高维图像，并实现定量组织学分析和单细胞空间分析。利用这一先进方法，我们能够识别罕见细胞群，例如双阴性T细胞，这类细胞采用常规方法难以检测。

结论：我们开发了一种经过验证的高通量sIHC方案，该方案采用标准IHC流程，并使用市售、经临床验证的现成抗体。该方法是一种有价值且具成本效益的工具，可从有限的病理样本（如人肾活检）中获取广泛的、高维度的、单细胞分辨率的空间数据。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.06.743188v1?rss=1

🏷️ 连续免疫组织化学 肾活检 单细胞空间分析 多重蛋白检测 图像共配准 数字病理