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HIV-1辅助蛋白Nef通过增强病毒复制、调节细胞信号传导以及逃避免疫识别，在病毒致病过程中发挥核心作用，因此成为极具吸引力的治疗干预靶点。Nef缺乏酶活性，而是通过与宿主细胞蛋白的多种相互作用发挥功能，其中包括Src家族酪氨酸激酶Hck。激酶激活可能需要Nef同源二聚化，因为破坏Nef二聚体界面的突变不仅会损害激酶激活，还会削弱Nef的许多其他功能。在本研究中，我们考察了二聚体界面突变所导致的结构后果及其对Nef与Hck调控结构域相互作用的影响。通过尺寸排阻色谱、多角度光散射和晶体学分析，我们发现二聚体界面残基Leu112和Phe121的突变可消除重组Nef蛋白的二聚化，同时保留Nef的整体折叠，从而形成与Hck SH3或SH3-SH2结构域蛋白的单体1:1复合物。这些结果表明，界面突变所引起的广泛表型效应源于Nef二聚化的丧失，而非整体错误折叠或SH3结合受到扰动。 我们还研究了Nef小分子抑制剂对同源二聚体形成的影响。这些化合物与导致二聚化缺陷的突变类似，能够抑制激酶激活、病毒复制，并恢复HIV感染细胞的免疫识别。利用SplitFAST荧光互补检测方法，我们提供了这些抑制剂在溶液中破坏Nef同源二聚体形成的直接证据。将野生型Nef:SH3复合物与一种抑制剂共结晶同样阻止了同源二聚体的形成。计算对接分析鉴定出6种活性Nef抑制剂共享的一个结合口袋，该口袋由Nef二聚体界面形成，而在单体中不存在。总之，我们的研究结果支持同源二聚化是Nef多种功能所必需的结构特征，并证实破坏该界面是针对HIV-1的一种有前景的治疗策略。
HIV-1辅助蛋白Nef通过增强病毒复制、调节细胞信号传导以及逃避免疫识别，在病毒发病机制中发挥核心作用，因此成为极具吸引力的治疗干预靶点。Nef缺乏酶活性，而是通过与宿主细胞蛋白（包括Src家族酪氨酸激酶Hck）发生多种相互作用来发挥功能。激酶激活可能需要Nef同源二聚化，因为破坏Nef二聚体界面的突变不仅会损害激酶激活，还会削弱Nef的许多其他功能。在本研究中，我们考察了二聚体界面突变所导致的结构后果及其对Nef与Hck调控结构域相互作用的影响。利用体积排阻色谱、多角度光散射和晶体学分析，我们发现二聚体界面残基Leu112和Phe121处的突变可消除重组Nef蛋白的二聚化，同时保留Nef的整体折叠，从而与Hck SH3或SH3-SH2结构域蛋白形成单体性1:1复合物。这些结果表明，界面突变所引起的广泛表型效应源于Nef二聚化的丧失，而非整体错误折叠或SH3结合受扰。我们还研究了Nef小分子抑制剂对同源二聚体形成的影响。这些化合物与二聚化缺陷突变类似，能够抑制激酶激活、病毒复制，并恢复免疫系统对HIV感染细胞的识别。通过SplitFAST荧光互补检测，我们提供了这些抑制剂在溶液中破坏Nef同源二聚体形成的直接证据。野生型Nef:SH3复合物与一种抑制剂的共结晶同样阻止了同源二聚体的形成。计算对接确定了六种活性Nef抑制剂共有的结合口袋，该口袋由Nef二聚体界面形成，而在单体中不存在。综上，我们的研究结果支持同源二聚化是许多Nef功能所必需的结构特征，并证实破坏这一界面是对抗HIV-1的一种有前景的治疗策略。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.08.10.744017v1?rss=1
🏷️ HIV-1 Nef 同源二聚化 Src家族激酶Hck 小分子抑制剂 蛋白互作 抗病毒靶点