依赖于IP6K1支持的V-ATPase活性的肥大细胞颗粒中多聚磷酸盐合成

聚磷酸盐（polyP）是由正磷酸残基组成的线性聚合物，富集于包括血小板和肥大细胞在内的哺乳动物特化细胞类型的分泌颗粒中。尽管已有研究表明，这些细胞在活化和脱颗粒过程中释放的聚磷酸盐能够促进血液凝固和炎症反应，但人们对调控分泌颗粒内聚磷酸盐合成的机制仍知之甚少。在小鼠中，IP6K1（催化生成5-InsP7的酶）缺失可导致血小板聚磷酸盐耗竭及止血功能受损。在本研究中，我们采用大鼠肥大细胞系RBL-2H3作为模型，研究分泌颗粒内聚磷酸盐合成的调控机制。通过实时监测分离的肥大细胞颗粒中的聚磷酸盐合成，我们证实ATP是驱动颗粒内聚磷酸盐生成的底物。利用抑制剂实验，我们发现，聚磷酸盐在颗粒中的积累依赖于由液泡型H⁺-ATP酶（V-ATPase）维持的完整跨膜质子梯度。在RBL-2H3细胞中，耗竭IP6K1会导致细胞内聚磷酸盐水平显著降低，并使聚磷酸盐、血清素和胰蛋白酶在颗粒内的积累发生缺陷。IP6K1水平降低的细胞表现出颗粒酸化能力的显著丧失，这与V-ATPase V1亚基水平下调相一致。补回具有活性的IP6K1或催化失活的IP6K1，均可挽救V-ATPase V1亚基的表达，逆转颗粒去酸化，并恢复IP6K1耗竭细胞中的聚磷酸盐水平。综上，这些数据揭示了IP6K1在维持颗粒pH值中的作用，并表明IP6K1由此支持哺乳动物中的聚磷酸盐合成。

多聚磷酸（polyP）是由正磷酸残基组成的线性聚合物，富集于包括血小板和肥大细胞在内的特化哺乳动物细胞类型的分泌颗粒中。尽管已有研究表明，这些细胞在活化和脱颗粒过程中释放的多聚磷酸能够促进血液凝固和炎症反应，但目前对于调控分泌颗粒内多聚磷酸合成的机制仍知之甚少。在小鼠中，IP6K1的缺失——IP6K1是一种催化生成5-InsP7的酶——已被证实会导致血小板多聚磷酸耗竭及止血功能受损。在本研究中，我们采用大鼠肥大细胞系RBL-2H3作为模型，研究分泌颗粒内多聚磷酸合成的调控机制。通过监测分离的肥大细胞颗粒中多聚磷酸的实时合成，我们证明ATP是驱动颗粒多聚磷酸生成的底物。利用抑制剂实验，我们发现，颗粒内多聚磷酸的积累依赖于由液泡型H+ ATPase（V-ATPase）维持的完整跨膜质子梯度。在RBL-2H3细胞中，耗竭IP6K1会导致细胞多聚磷酸水平显著降低，并造成颗粒内多聚磷酸、5-羟色胺和胰蛋白酶的积累缺陷。IP6K1水平降低的细胞表现出颗粒酸化的显著丧失，这与V-ATPase V1亚基水平下调相一致。重新表达具有活性或催化失活的IP6K1，均可挽救V-ATPase V1亚基的表达，逆转颗粒去酸化，并恢复IP6K1耗竭细胞中的多聚磷酸水平。综上，这些数据揭示了IP6K1在维持颗粒pH值方面的作用，并表明IP6K1由此支持哺乳动物细胞中的多聚磷酸合成。

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🏷️ 聚磷酸盐合成 肥大细胞分泌颗粒 IP6K1 V-ATPase 颗粒酸化 细胞脱颗粒