用于RNA基因电路稳健表达的高滴度慢病毒载体工程化

慢病毒载体能够高效递送用于基因治疗和细胞治疗的遗传载荷。由于其约 10 kb 的包装上限，慢病毒载体可编码多个转录单元，从而支持紧凑型基因回路的递送。基于 RNA 的装置可提供高度紧凑的调控功能，包括配体响应性诱导和闭环调节。然而，核酶和剪接开关等 RNA 装置可能通过作用于单链 RNA 基因组而干扰载体生产。在此，我们考察基因语法和遗传元件的影响，以确立用于编码 RNA 装置的双基因载体的设计策略。我们发现，在生产过程中，凡是会干扰病毒转录本转录或加工的遗传元件，都会导致滴度下降。与初始载体相比，我们性能最佳的设计将滴度提高了 30 倍以上，从而能够在非单调变化的表达景观中对表达进行精细调控，以优化细胞命运转换。总之，这项工作阐明了构建兼具高滴度和稳健表达的双基因慢病毒载体的原则，从而提高其在下游应用中的效能。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.05.12.724401v1?rss=1

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