转录本特异性定点RNA编辑揭示剪接感知型向导RNA设计原则

利用作用于RNA的腺苷脱氨酶（ADAR）酶进行的定点RNA编辑（SDRE），通常借助经过优化的引导RNA（gRNA）来实现，以增强目标位点编辑并尽量减少旁观者效应。然而，gRNA结合以及ADAR介导的SDRE对经典前体mRNA剪接的影响，仍然知之甚少。在本研究中，我们开发了一种体外转录本特异性编辑策略，使得能够对前体mRNA和成熟mRNA中的SDRE进行选择性靶向和直接比较。以与遗传性视网膜疾病相关的剪接相关变异为模型，我们研究了SDRE对外显子、近经典内含子以及深部内含子剪接变异的影响。我们在外显子和内含子靶点中鉴定出由gRNA诱导的剪接扰动，并观察到较高的编辑水平可能与更严重的剪接破坏相关。相反，对两个外显子剪接变异和一个深部内含子变异进行SDRE后，正确剪接转录本的生成增加，表明SDRE具有用于剪接调控的潜力。最后，通过解析ADAR表达和gRNA设计对编辑及剪接结果的影响，我们建立了一套用于识别设计原则的体系，以减少对剪接的干扰并增强正确剪接且已编辑转录本的生成。这些发现凸显了在开发基于SDRE的治疗策略时，考虑转录本背景和剪接后果的重要性。

利用作用于RNA的腺苷脱氨酶（ADAR）酶进行的位点定向RNA编辑（SDRE），通常借助经过优化的引导RNA（gRNA）来实现，以增强目标位点编辑效率并尽量减少旁观者效应。然而，gRNA结合以及ADAR介导的SDRE对经典前体mRNA剪接的影响仍知之甚少。在本研究中，我们开发了一种体外转录本特异性编辑策略，使得能够对前体mRNA和成熟mRNA中的SDRE进行选择性靶向和直接比较。利用与遗传性视网膜疾病相关的剪接相关变异，我们研究了SDRE对外显子、近经典内含子以及深部内含子剪接变异的影响。我们在外显子和内含子靶点中鉴定出由gRNA诱导的剪接扰动，并观察到较高的编辑水平可能与更严重的剪接破坏相关。相反，对两个外显子剪接变异和一个深部内含子变异进行SDRE可增加正确剪接转录本的产生，表明SDRE具有调控剪接的潜力。最后，通过解析ADAR表达和gRNA设计对编辑及剪接结果的影响，我们建立了一个用于识别设计原则的体系，该体系可减少对剪接的干扰并增强正确剪接且已编辑转录本的生成。这些发现突显了在开发基于SDRE的治疗策略时考虑转录本背景和剪接后果的重要性。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.30.741163v1?rss=1

🏷️ RNA编辑 ADAR 向导RNA设计 mRNA剪接 转录本特异性 遗传性视网膜疾病