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背景：SARS-CoV-2受体结合域（RBD）的重组表达对于疫苗开发、血清学诊断和机制研究至关重要。原代人类成纤维细胞能够提供具有生理相关性的蛋白质折叠和翻译后修饰，但其寿命较短，限制了规模化生产。我们采用永生化人脾成纤维细胞系稳定表达RBD-sfGFP，以进行纵向表征和后续研究。 方法：采用电穿孔法将编码SARS-CoV-2 RBD与superfolder GFP（sfGFP）融合蛋白的质粒转染至永生化人原代脾成纤维细胞中；该质粒同时携带新霉素抗性盒（neoR），用于G418筛选。建立了4个独立的G418抗性培养物（n=4），分别来源于不同的筛选培养瓶，命名为HPSF-IM-RBD-BHSKPU T1-T4。根据既往筛选结果，对其中2个培养物（T1、T3）进行了为期98天（14代传代，P1-P14）的监测；另外2个培养物（T2、T4）进行了为期42天（6代传代，P1-P6）的监测。每隔7天通过荧光显微镜评估RBD-sfGFP的表达。每个时间点采集2个视野进行成像，并分析相对荧光强度（归一化至全局最大值=100%）和平均荧光强度（MFI，归一化至全局最大值=100%）。同时计算变异系数（CV）、线性回归和Pearson相关系数。 结果：4个培养物均表现出强烈的GFP荧光，证实外源转基因得到稳定保留。表达水平排序为：T1（93.1% +/- 3.6%）> T3（89.2% +/- 3.4%）> T2（84.2% +/- 3.2%）> T4（79.7% +/- 3.9%）。长期培养的T1和T3在第98天时仍保留约100%的第7天信号（T1：100.7%；T3：100.0%）。表达呈现依赖传代的振荡，而非逐步沉默。T1中的CV随时间增加（1.5% -> 8.5%），提示细胞间异质性不断增强。荧光强度与MFI之间存在显著正相关（Pearson r = 0.823，p = 7.44 x 10^-11），提示群体水平调控具有一致性。 结论：HPSF-IM-RBD-BHSKPU细胞可在超过3个月的时间内稳定保留RBD-sfGFP表达，验证了其作为重组蛋白生产平台的应用价值。然而，其振荡性动态变化和异质性增加与不同整合位点上的位置效应斑驳化现象一致。因此，对于需要最大均一性的应用而言，早期传代（P1-P4）为最佳选择。最终，这些细胞不仅为RBD生产提供了实用工具，也为在人原代成纤维细胞背景下研究转基因表达的表观遗传调控提供了有价值的模型。
原代人脾成纤维细胞中稳定 SARS-CoV-2 RBD-sfGFP 表达的表观遗传调控 | bioRxiv
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原代人脾成纤维细胞中稳定 SARS-CoV-2 RBD-sfGFP 表达的表观遗传调控
查看 ORCID 个人资料 Karanveer Singh Maan ， 查看 ORCID 个人资料 Zara Ahmed Baloch ， Suraj Singh Bhullar ， 查看 ORCID 个人资料 Ishan Vashishat ， 查看 ORCID 个人资料 Barnabe D. Assogba
doi： https://doi.org/10.64898/2026.07.22.739919
Karanveer Singh Maan 昆特兰理工大学 在 Google Scholar 上查找该作者 在 PubMed 上查找该作者 在持有人为作者/资助方，其已授予 bioRxiv 永久展示该预印本的许可。 本文依据 CC-BY 4.0 国际许可协议 发布。
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发布于 2026 年 7 月 23 日。 下载 PDF 电子邮件
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原代人脾成纤维细胞中稳定 SARS-CoV-2 RBD-sfGFP 表达的表观遗传调控 Karanveer Singh Maan ， Zara Ahmed Baloch ， Suraj Singh Bhullar ， Ishan Vashishat ， Barnabe D. Assogba bioRxiv 2026.07.22.739919； doi： https://doi.org/10.64898/2026.07.22.739919
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.22.739919v1?rss=1
🏷️ 表观遗传调控 SARS-CoV-2 RBD 稳定转基因表达 人脾成纤维细胞 重组蛋白生产 位置效应斑驳化