通过选择性质膜去稳定化实现微型化溶酶体富集

细胞器富集是对细胞亚细胞区室进行无偏生化分析的先决条件。该步骤的执行对于实验成功具有决定性作用；尽管下游分析策略，如酶学测定、Western blotting 或基于质谱（MS）的组学方法，具有很高的灵敏度，但通常仍需要数千万个细胞，这形成了鲜明反差。在此，我们证明了质膜的选择性破裂是限制细胞数量进一步减少的关键因素，并提出了一种克服这一限制的方法，即先通过去污剂介导的质膜去稳定化处理，随后进行机械匀浆。通过将该策略与两种常用的溶酶体富集方法结合，即超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIONs）和通过 3xHA 标记的 TMEM192 进行免疫沉淀（TMEM IP），我们将溶酶体富集所需的细胞数量缩减至仅 50 万个，并证明减少输入细胞数量能够在样品纯度和细胞器蛋白质组表征方面获得更优结果。

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细胞器富集是对细胞亚细胞区室进行无偏生化分析的前提条件。这一步骤的表现对实验成功具有决定性意义。尽管下游分析策略，如酶学测定、蛋白质印迹或基于质谱（MS）的组学方法，具有很高的灵敏度，但通常仍需要数千万个细胞，这形成了鲜明反差。在此，我们证明了质膜的选择性破裂是限制细胞数量减少的关键因素，并提出了一种克服这一限制的方法：通过基于去污剂的质膜去稳定化处理，随后进行机械匀浆。通过将该策略与两种常用的溶酶体富集方法相结合，即超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIONs）和通过带有 3xHA 标签的 TMEM192 进行的免疫沉淀（TMEM IP），我们将溶酶体富集所需的细胞数量缩减至仅 50 万个，并证明减少输入细胞数量在样持有人为作者/资助方，其已授予 bioRxiv 永久展示该预印本的许可。

本文依据 CC-BY 4.0 国际许可协议 公开提供。

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发布于 2026 年 7 月 23 日。

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通过选择性质膜去稳定化实现微型化溶酶体富集

Sofia

Fajardo-Callejon

，

Dominic

Winter

高级作者

bioRxiv

2026.07.23.740280；

doi：

https://doi.org/10.64898/2026.07.23.740280

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通过选择性质膜去稳定化实现微型化溶酶体富集

Sofia

Fajardo-Callejon

，

Dominic

Winter

高级作者

bioRxiv

2026.07.23.740280；

doi：

https://doi.org/10.64898/2026.07.23.740280

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.23.740280v1?rss=1

🏷️ 溶酶体富集 质膜去稳定化 细胞器分离 蛋白质组学 免疫沉淀 SPIONs纳米颗粒