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由富含亮氨酸重复序列的8（LRRC8）蛋白形成的体积调节性阴离子通道（VRAC）是一类广泛表达的氯离子通道，对于细胞体积调节至关重要，并参与多种生理和病理过程。据报道，小分子VRAC抑制剂能够调节旁分泌信号传导、增殖、分化、迁移和凋亡，并已被申请专利用于卒中、心血管与代谢性疾病以及癌症等潜在治疗应用。然而，越来越多的证据表明，许多常用的VRAC阻断剂具有显著的脱靶效应，并且常常无法重现删除VRAC必需亚基LRRC8A后所观察到的表型。 在本研究中，我们系统比较了多种广泛使用的药理学VRAC抑制剂的作用与通过分子手段下调LRRC8A在限制来源于手术标本的恶性胶质母细胞瘤细胞增殖方面的结果。NIH/3T3成纤维细胞作为非恶性对照。在含血清培养基中，结构多样的VRAC阻断剂（DCPIB、DIDS、甘珀酸、根皮素和溴敌隆）以不一致的方式降低细胞增殖，其效力与已报道的VRAC亲和力并不相关，并且在不同细胞系之间存在显著差异。基于放射性示踪剂的VRAC活性测定表明，这些差异在很大程度上可归因于抑制剂与血清白蛋白的结合。 当在无血清条件下重复实验时，除DIDS和根皮素外，所有抑制剂均诱导了恶性和非恶性细胞的广泛死亡，这一点通过显微镜观察和LDH释放实验得到证实。这种细胞毒性伴随着细胞内ATP水平的显著下降，与先前报道的线粒体解偶联效应一致。相比之下，LRRC8A敲低在未引起明显细胞死亡的情况下抑制了细胞增殖。 综上，这些发现表明，大多数市售VRAC阻断剂限制细胞增殖和存活主要是通过非VRAC依赖性机制实现的。在标准培养条件下，血清白蛋白掩盖了其内在细胞毒性的大部分。这些结果强调了在药理学研究中采用严格分子学对照的必要性，并为开发选择性更高、毒性更低的VRAC靶向药物提供了指导。
由富含亮氨酸重复序列的8（LRRC8）蛋白形成的容量调节性阴离子通道（VRAC）是广泛表达的氯离子通道，对于细胞体积调节至关重要，并与多种生理和病理过程相关。已有研究报道，小分子VRAC抑制剂可调节旁分泌信号传导、增殖、分化、迁移和凋亡，并已申请专利用于卒中、心血管和代谢性疾病以及癌症的潜在治疗应用。然而，越来越多的证据表明，许多常用的VRAC阻断剂具有显著的脱靶效应，并且常常无法重现删除关键VRAC亚基LRRC8A后所观察到的表型。在本研究中，我们系统比较了几种广泛使用的药理学VRAC抑制剂的作用，以及通过分子手段下调LRRC8A在限制来源于手术标本的恶性胶质母细胞瘤细胞增殖方面所产生的结果。NIH/3T3成纤维细胞作为非恶性对照。在含血清培养基中，结构多样的VRAC阻断剂（DCPIB、DIDS、甘珀酸、根皮素和溴敌隆）以不一致的方式降低细胞增殖，其效力与已报道的VRAC亲和力并不相关，且在不同细胞系之间差异显著。基于放射性示踪剂的VRAC活性测量表明，这些差异主要归因于抑制剂与血清白蛋白的结合。当在无血清条件下重复实验时，除DIDS和根皮素外，所有抑制剂均诱导恶性和非恶性细胞发生广泛死亡，这一点通过显微镜观察和LDH释放实验得到证实。这种细胞毒性伴随着细胞内ATP水平的显著降低，与先前报道的线粒体解偶联效应一致。相比之下，LRRC8A敲低可降低细胞增殖，而不会引起明显的细胞死亡。综上所述，这些发现表明，大多数市售VRAC阻断剂主要通过非VRAC依赖性机制限制细胞增殖和存活。在标准培养条件下，血清白蛋白掩盖了其大部分内在细胞毒性。这些结果强调了在药理学研究中采用严格分子对照的必要性，并为开发选择性更高、毒性更低的VRAC靶向药物提供了指导。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.13.737859v1?rss=1
🏷️ VRAC通道 LRRC8A 脱靶毒性 白蛋白结合 胶质母细胞瘤 药理抑制剂