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背景 足细胞损伤与丢失是慢性肾脏病（CKD）进展的核心驱动因素，并参与了大多数肾小球疾病的发生。在与足细胞功能障碍相关的分子通路中，微小RNA-21（miR-21）在肾小球损伤过程中持续上调，并抑制包括PTEN在内的保护性靶基因。尽管抗miR-21策略在Alport综合征和糖尿病肾病的临床前模型中显示出较高疗效，但游离抗miR-21寡核苷酸的临床转化仍面临挑战，这可能反映了其对肾小球及足细胞靶点的作用不足。在本研究中，我们表明，通过外泌体介导递送LNA-miR-21抑制剂可实现更高的细胞内摄取，从而导致足细胞中miR-21的功能性抑制及PTEN的恢复。 方法 从永生化小鼠足细胞SVI中分离外泌体，并直接装载荧光标记的LNA anti-miR-21（LNA-21）和anti-miR-Ctrl。通过透射电子显微镜、动态光散射以及CD9和TSG101的Western blot分析评估外泌体完整性。采用共聚焦激光扫描显微镜、时间序列成像（2–48 h）和（成像）流式细胞术分析摄取效率和细胞内递送。通过TaqMan RT-qPCR以及在分化的SVI足细胞、原代小鼠足细胞和嘌呤霉素氨核苷（PAN）损伤的原代肾小球中检测PTEN蛋白表达来评估功能效应。 结果 在直接装载LNA-miR-21后，外泌体数量、形态和标志物表达均保持不变。时间序列成像显示，外泌体递送的LNA-21载荷自2至48 h在细胞内逐渐积累，而游离LNA-21未显示出可检测的摄取。流式细胞术和成像流式细胞术证实，仅通过外泌体可实现高效（76.6%）的细胞内递送。外泌体介导的LNA-21递送诱导了显著的miR-21抑制，使永生化足细胞中miR-21降低99%、原代足细胞中降低97%、PAN损伤肾小球中降低97%（均p背景 足细胞损伤和丢失是慢性肾脏病（CKD）进展的核心驱动因素，并参与了大多数肾小球疾病的发生。在与足细胞功能障碍相关的分子通路中，微小RNA-21（miR-21）在肾小球损伤期间持续上调，并抑制包括PTEN在内的保护性靶基因。尽管抗miR-21策略在Alport综合征和糖尿病肾病的临床前模型中已显示出较高疗效，但游离抗miR-21寡核苷酸的临床转化仍面临挑战，这可能反映了其对肾小球和足细胞靶点的作用不足。在此，我们表明，通过外泌体介导递送LNA-miR-21抑制剂可实现更高的细胞内摄取，从而在足细胞中导致功能性miR-21抑制和PTEN恢复。
方法 外泌体从永生化小鼠足细胞SVI中分离获得，并直接负载荧光标记的LNA anti-miR-21（LNA-21）和anti-miR-Ctrl。通过透射电子显微镜、动态光散射以及对CD9和TSG101的Western blot分析评估外泌体完整性。采用共聚焦激光扫描显微镜、时间序列成像（2–48 h）和（成像）流式细胞术分析摄取效率和细胞内递送。通过TaqMan RT-qPCR以及在分化的SVI足细胞、原代小鼠足细胞和嘌呤霉素氨核苷（PAN）损伤的原代肾小球中检测PTEN蛋白表达来评价功能学效应。
结果 在直接负载LNA-miR-21后，外泌体数量、形态和标志物表达均保持不变。时间序列成像显示，外泌体递送的LNA-21货物在2至48 h内于细胞内逐渐积累，而游离LNA-21未显示出可检测的摄取。流式细胞术和成像流式细胞术证实，仅通过外泌体实现了高效（76.6%）的细胞内递送。外泌体介导的LNA-21递送诱导了显著的miR-21抑制，在永生化足细胞中降低99%，在原代足细胞中降低97%，在PAN损伤肾小球中降低97%（均p
结论 这些发现表明，外泌体介导的LNA递送克服了游离抑制性寡核苷酸在足细胞中摄取受限的问题，并能够在多个实验系统中实现对miR-21的功能性抑制。这些数据为基于外泌体的miR抑制剂递送作为一种潜在策略以改善CKD中足细胞靶向治疗提供了机制性概念验证。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.17.738885v1?rss=1
🏷️ 外泌体递送 miR-21抑制 足细胞 PTEN恢复 LNA抗miR