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准确估计蚊虫年龄对于疟疾监测至关重要，因为只有年龄较大的按蚊属雌蚊才能传播寄生虫。传统的年龄分级方法包括 Polovodova 技术，即通过计数卵巢小柄上的膨大数目来统计已完成的生殖营养周期（gonotrophic cycles, GC）。尽管这些技术已被广泛使用，但在贴近实际操作条件下仍缺乏充分验证，关于其在不同经产率、生殖营养周期及物种间的精密度和准确性的证据也较为有限。在本研究中，我们在实验室和野外条件下，针对多个年龄判读者和多个物种评估了 Polovodova 方法的准确性和精密度。研究采用盲法验证设计，使用实验室饲养的阿拉伯按蚊（Anopheles arabiensis）和芬纳斯按蚊（Anopheles funestus）（N > 3,600），涵盖四个生殖营养周期，以及采自坦桑尼亚乌兰加地区的野外蚊虫（N = 600）。三名盲法研究人员进行解剖和判读，第四名非盲法研究人员作为参考判读者（R0），用于获得实验室蚊虫的真实值（针对经产性）或假定真实值（针对生殖营养周期）。经产性和生殖营养周期分类的准确性与精密度通过两两评定者间比较、一致率、Fleiss's kappa 和 Cohen's kappa（κ）统计量进行评估。对于没有年龄参照分组的野外蚊虫，仅评估精密度。 Polovodova 方法能够准确判定两种蚊虫的经产性，与参考数据集相比，可正确识别 98–100% 的未产蚊和 94–96% 的经产蚊。在阿拉伯按蚊和芬纳斯按蚊中，经产性判定的评定者间一致性几乎达到完美水平（κ = 0.81–0.83），两两一致率为 82–96%。生殖营养周期分类在早期阶段（GC0–GC2）具有较高准确性（85–100%），但在后期阶段 GC4 准确性下降（34–46%），反映出对蚊虫年龄的系统性低估。总体而言，GC 判定的一致性为中等水平（κ = 0.56–0.59）。野外样本的分类表现出几乎完美的一致性（κ = 0.87–0.88），支持其在实际操作中的适用性。 Polovodova 方法能够对按蚊的经产性和早期生殖营养周期状态提供稳健估计，但后期周期分类更容易出现判读者间分歧以及系统性低估。因此，在实际应用中，应依赖经过培训的多判读者工作流程，包括对判定不一致或处于后期周期的样本进行复核裁定，而非采用单一判读者分类。这些发现为在疟疾媒介监测和干预效果评估中开展质量保证的 Polovodova 年龄分级提供了经验性基准。
准确估计蚊龄对于疟疾监测至关重要，因为只有年龄较大的按蚊属雌蚊才能传播疟原虫。传统的年龄分级方法包括 Polovodova 技术，即通过计数卵巢小柄上的膨大数目来统计已完成的生殖营养周期（gonotrophic cycles，GC）。尽管这些技术被广泛使用，但在真实业务条件下仍缺乏充分验证，关于其在不同经产率、GC 和物种之间的精密度与准确度的证据也较为有限。在本研究中，研究者在实验室和野外条件下，针对多个年龄分级判读者和不同物种评估了 Polovodova 方法的准确度与精密度。研究采用盲法验证设计，使用实验室饲养的阿拉伯按蚊（Anopheles arabiensis）和粉腿按蚊（Anopheles funestus）（N > 3,600），覆盖四个生殖营养周期，以及采自坦桑尼亚乌兰加区的野外蚊虫样本（N = 600）。三位盲法研究人员进行解剖和判读，另有第四位非盲法研究人员作为参考判读者（R0），为实验室蚊虫获得真实值（用于经产性）或假定真实值（用于 GC）。经产性和生殖营养周期分类的准确度与精密度通过两两评定者比较、一致率、Fleiss κ 系数和 Cohen κ（κ）统计量进行评估。对于没有年龄参照分组的野外蚊虫，仅评估精密度。Polovodova 方法能够准确判定两种按蚊的经产性，与参考数据集相比，未产蚊的正确识别率为 98–100%，经产蚊的正确识别率为 94–96%。在阿拉伯按蚊和粉腿按蚊中，经产性判定的评定者间一致性几乎达到完美水平（κ = 0.81–0.83），两两一致率为 82–96%。GC 分类在早期阶段（GC0–GC2）具有很高的准确度（85–100%），但在后期阶段 GC4 准确度下降（34–46%），这反映出对蚊龄的系统性低估。总体而言，GC 判定的一致性为中等水平（κ = 0.56–0.59）。野外样本的分类结果显示出几乎完美的一致性（κ = 0.87–0.88），支持其在实际业务中的适用性。Polovodova 方法能够对按蚊的经产性和早期生殖营养周期状态提供稳健估计，但后期周期分类更容易出现判读者间分歧和系统性低估。因此，实际应用应依赖经过培训的多判读者工作流程，包括对存在分歧或处于后期周期的标本进行复核裁定，而非采用单一判读者分类。这些发现为疟疾媒介监测和干预评估中经质量保证的 Polovodova 年龄分级提供了经验性基准。
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📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.15.738643v1?rss=1
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