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Dravet 综合征是一种由 SCN1A 单倍体剂量不足引起的严重癫痫性脑病，这会导致表达副肌钙蛋白（parvalbumin，PV）的中间神经元中 NaV1.1 表达降低，并破坏脑内兴奋性—抑制性平衡。我们开发了一种基于 AAV 的 CRISPR 激活系统（AAV9-E2-dCas9-VP64），用于在 PV 中间神经元中从其内源性位点选择性上调 SCN1A。 针对人 SCN1A 启动子开展的体外饱和向导 RNA（gRNA）筛选鉴定出一个候选首选向导，其对 SCN1A 位点具有强效且高度特异的靶向激活作用。该首选 gRNA 随后在人 Dravet 综合征模型 GABA 能神经元中得到验证，观察到呈剂量依赖性且特异性的 SCN1A 上调。 在 Dravet 综合征小鼠模型中进行脑室内（ICV）给药后，表现出剂量依赖性的生存改善，同时降低了对高热诱发癫痫发作的易感性并提高了 NaV1.1 蛋白表达，且保持了对 PV 中间神经元的选择性，并仅有极少的脱靶表达。在幼年食蟹猴研究中，在 MRI 引导下进行的 ICV 给药耐受性良好，实现了广泛的皮层分布，并持续保持对外周组织的强去靶向作用，外周 dCas9 表达显著低于脑内表达。 这些结果支持通过 CRISPR 激活实现 PV 中间神经元选择性的 SCN1A 基因调控，作为 Dravet 综合征一种有前景的治疗策略。AAV9-E2-dCas9-VP64（RT101）目前正处于临床前开发阶段，并正推进至临床评估。
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Dravet综合征是一种严重的癫痫性脑病，由SCN1A单倍剂量不足引起，这会导致表达小清蛋白（parvalbumin，PV）的中间神经元中NaV1.1表达降低，并破坏脑内兴奋—抑制平衡。我们开发了一种基于AAV的CRISPR激活系统（AAV9-E2-dCas9-VP64），用于在PV中间神经元中从其内源性位点选择性上调SCN1A。针对人SCN1A启动子开展的一项体外饱和向导RNA（gRNA）筛选鉴定出一条领先向导，该向导可对SCN1A位点实现强效且高度特异的靶向激活。该领先gRNA随后在人Dravet综合征模型GABA能神经元中得到验证，观察到剂量依赖性且特异性的SCN1A上调。在Dravet综合征小鼠模型中进行脑室内（ICV）给药后，动物生存率呈剂量依赖性改善，同时高热诱发性癫痫发作易感性降低，NaV1.1蛋白表达增加，并保持了对PV中间神经元的选择性以及极低的脱靶表达。在幼年食蟹猴研究中，在MRI引导下进行ICV载体给药具有良好耐受性，实现了广泛的皮层生物分布，并持续保持对外周组织的强去靶向作用，且外周dCas9表达显著低于脑内。这些结果支持通过CRISPR激活在PV中间神经元中选择性调控SCN1A，作为Dravet综合征一种具有前景的治疗策略。AAV9-E2-dCas9-VP64（RT101）目前正处于临床前开发阶段，并正推进至临床评估。
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发布于2026年7月14日。
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Dravet综合征中靶向PV中间神经元的CRISPRa对SCN1A单倍剂量不足的挽救
Perry WE Spratt ， Nicholas F Trojanowski ， Rajani M George ， Olivia Stevenson ， Tessa Nottonson ， Joshua Reiser ， Lucia Capano ， Andrew R Field ， Jaclyn Essig ， Michael Faundo ， Yan Hung ， Navneet Matharu ， Charlie Harper ， Orrin Devinsky ， Jordane Dimidschstein ， Kathryn C Allaway
bioRxiv 2026.07.12.737793； doi： https://doi.org/10.64898/2026.07.12.737793
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Dravet综合征中靶向PV中间神经元的CRISPRa对SCN1A单倍剂量不足的挽救
Perry WE Spratt ， Nicholas F Trojanowski ， Rajani M George ， Olivia Stevenson ， Tessa Nottonson ， Joshua Reiser ， Lucia Capano ， Andrew R Field ， Jaclyn Essig ， Michael Faundo ， Yan Hung ， Navneet Matharu ， Charlie Harper ， Orrin Devinsky ， Jordane Dimidschstein ， Kathryn C Allaway
bioRxiv 2026.07.12.737793； doi： https://doi.org/10.64898/2026.07.12.737793
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.12.737793v1?rss=1
🏷️ Dravet综合征 SCN1A单倍剂量不足 CRISPRa PV中间神经元 AAV基因治疗 癫痫脑病