在体外重构过氧化物还原酶2:STAT3瞬时氧化还原接力复合物的挑战

过氧化还原蛋白2（Peroxiredoxin 2，Prdx2）通过将氧化当量转移至靶蛋白来介导氧化还原信号传导，这些靶蛋白包括STAT3——一种对氧化还原敏感、与炎症和癌症相关的转录因子。尽管这种相互作用已在细胞中得到证实，但由于其具有瞬时性和氧化还原依赖性，在体外重构Prdx2:STAT3复合物仍然具有挑战性。在本研究中，我们测试了多种用于稳定无标签Prdx2与STAT3核心片段（CF-STAT3）之间复合物的条件，包括氧化剂、去污剂、促进因子膜联蛋白A2（Annexin A2）、厌氧环境以及CovalX交联。复合物形成通过质量光度法、分析型体积排阻色谱（SEC）、SEC-MALS和电子显微镜（EM）进行评估。在标准条件下，未观察到稳定复合物。厌氧环境可短暂稳定该相互作用，但冷冻电镜未能解析其结构。CovalX交联产生了寿命较短但均一的复合物。我们发现，Prdx2的过氧化物酶活性半胱氨酸对过氧化尤其敏感，特别是在DTT或过量H2O2存在时，从而导致功能丧失。在纯化过程中维持非还原条件可使Prdx2保持氧化能力状态，促进过氧化物酶活性半胱氨酸与解析半胱氨酸之间二硫键的形成，从而能够重复检测到其与CF-STAT3形成的弱复合物。我们的研究结果为体外研究氧化还原接力蛋白复合物建立了一个框架，并强调了在蛋白质处理过程中对氧化状态进行管理的重要性。

过氧化物还原酶2（Prdx2）通过将氧化当量转移至靶蛋白（如STAT3）来介导氧化还原信号传导；STAT3是一种氧化还原敏感的转录因子，与炎症和癌症有关。尽管这种相互作用已在细胞中得到证实，但重构Prdx2:STAT3复合物

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.03.731362v1?rss=1

🏷️ 过氧化还原蛋白2 STAT3 氧化还原信号传导 瞬时蛋白复合物 二硫键形成 体外重构