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rAAV2.5T 是通过在气液界面（ALI）培养的极化人气道上皮（HAE）中，对 AAV 衣壳文库进行定向进化而鉴定得到的。rAAV2.5T 的衣壳基因是一个嵌合体，由 AAV2 VP1 的 N 端特异区域（VP1u）以及 AAV5 的 VP2 和 VP3 区域组成，并在衣壳可变区（VR）VIII 处具有单一的 A581T 替换。GPR108 是一种 G 蛋白偶联受体，已知是 rAAV2 转导所必需的宿主因子，但并非 rAAV5 转导所必需。AAV2 和 AAV5 的 VP1u 均可与 GPR108 良好共定位，并且在较低程度上与反式高尔基网络（TGN）共定位。GPR108 敲除（KO）在 HeLa 细胞和 HAE-ALI 培养中均完全消除了 rAAV2.5T 的转导。值得注意的是，以 2 M 浓度进行短期多柔比星（DOX）处理可完全恢复转导，表明 DOX 能够补偿 GPR108 功能的缺失。DOX 在野生型 HAE-ALI 培养中将 rAAV2.5T 的转导提高了 50–100 倍，而在 GPR108 缺陷培养中提高了 300 倍以上。机制研究表明，这种增强源于细胞内转运途径的改变，从而促进了载体高效进入细胞核，而非由于载体内化增加、蛋白酶体抑制或 DNA 损伤反应激活所致。重要的是，我们鉴定出 AAV2 VP1u 的 N 端前 15 个氨基酸是决定 rAAV2.5T 转导依赖 GPR108 的主要因素。总体而言，这些研究结果表明，rAAV2.5T 在极化 HAE 培养中的有效转导依赖于 GPR108 介导的细胞内转运过程，该过程限制了载体高效进入细胞核，而 DOX 可通过促进载体高效导入来解除这一限制。
rAAV2.5T 是通过在气液界面（ALI）培养的极化人气道上皮（HAE）中，对 AAV 衣壳文库进行定向进化而鉴定得到的。rAAV2.5T 的衣壳基因是一个嵌合体，由 AAV2 VP1 的 N 端独特区域（VP1u）以及 AAV5 的 VP2 和 VP3 区域构成，并在衣壳可变区（VR）VIII 具有单一的 A581T 替换。G 蛋白偶联受体 GPR108 被认为是 rAAV2 转导所必需的宿主因子，但对 rAAV5 的转导则并非如此。AAV2 和 AAV5 的 VP1u 均与 GPR108 显示出良好的共定位，并且在较低程度上与反式高尔基网络（TGN）共定位。GPR108 敲除（KO）在 HeLa 细胞和 HAE-ALI 培养中均完全消除了 rAAV2.5T 的转导。值得注意的是，以 2 M 浓度进行短期多柔比星（DOX）处理可完全恢复其转导，表明 DOX 能够补偿 GPR108 功能的缺失。DOX 在野生型 HAE-ALI 培养中将 rAAV2.5T 的转导提高了 50–100 倍，而在 GPR108 缺陷培养中则提高了 300 倍以上。机制研究表明，这种增强来源于细胞内转运的改变，从而促进了载体高效进入细胞核，而非由于载体内吞增加、蛋白酶体抑制或 DNA 损伤反应的激活。重要的是，我们鉴定出 AAV2 VP1u 的 N 端前 15 个氨基酸是决定 rAAV2.5T 转导依赖 GPR108 的主要因素。总体而言，这些发现表明，rAAV2.5T 在极化 HAE 培养中的有效转导依赖于 GPR108 介导的细胞内转运，该过程限制了载体高效进入细胞核；而 DOX 可通过促进载体高效导入而解除这一限制。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.10.737643v1?rss=1
🏷️ AAV衣壳工程 GPR108 气道上皮转导 VP1u功能区 多柔比星挽救