流体动力剪切促进功能性肿瘤抗原反应性T细胞的富集

过继性T细胞疗法依赖于对稀有肿瘤反应性T细胞的识别与扩增，然而当前的富集策略受限于这类细胞的低丰度以及其功能性富集过程的复杂性。在此，我们提出了一种微流控平台，该平台利用流体动力学剪切力作为可控参数，通过肽-主要组织相容性复合体（pMHC）介导的捕获来富集抗原特异性T细胞。我们构建了一种八通道微流控器件，可在保持细胞递送均一性的同时，对一系列壁面剪切应力进行同步检测，从而能够系统性地鉴定使抗原特异性富集最大化的剪切条件。利用工程化的MART-1特异性Jurkat细胞，我们证明T细胞捕获受壁面剪切应力和pMHC密度的共同调控，其中中等水平的剪切力可优先富集抗原特异性细胞而非非特异性结合细胞。将最优操作条件转移至高通量单一剪切器件后，我们实现了从仅含0.05%目标细胞的外周血单个核细胞中对抗原特异性T细胞约35倍的富集。我们进一步表明，直接从黑色素瘤全细胞裂解液中分离的肽-MHC复合物，能够支持与重组pMHC相当的剪切力依赖性富集。最后，采用肿瘤来源pMHC富集得到的原代MART-1特异性CD8 T细胞保留了识别黑色素瘤细胞的能力，并在抗原特异性刺激后上调活化标志物CD137。综上，这些发现确立了流体动力学剪切力作为抗原特异性T细胞富集的一种正交参数，并为将基于力的筛选与肿瘤来源pMHC相结合以分离功能性抗原特异性T细胞提供了框架。

过继性T细胞治疗依赖于稀有肿瘤反应性T细胞的鉴定与扩增，然而当前的富集策略受限于此类细胞的低丰度及其功能性富集过程的复杂性。在此，我们提出一种微流控平台，利用流体动力学剪切作为可控参数，通过肽-主要组织相容性复合体（pMHC）介导的捕获来富集抗原特异性T细胞。我们构建了一种八通道微流控器件，可在保持细胞递送均一性的同时，平行检测一系列壁面剪切应力，从而能够系统鉴定使抗原特异性富集最大化的剪切条件。利用工程化的MART-1特异性Jurkat细胞，我们证明T细胞捕获受壁面剪切应力和pMHC密度的共同调控，其中中等剪切优先富集抗原特异性细胞而非非特异性结合细胞。将最佳操作条件转化至高通量单一剪切器件后，我们实现了对仅含0.05%目标细胞的外周血单个核细胞中抗原特异性T细胞约35倍的富集。我们进一步表明，直接从黑色素瘤全细胞裂解液中分离的肽-MHC复合物所支持的剪切依赖性富集效果可与重组pMHC相当。最后，使用肿瘤来源pMHC富集的原代MART-1特异性CD8 T细胞保留了识别黑色素瘤细胞的能力，并在抗原特异性刺激后上调活化标志物CD137。综上，这些发现确立了流体动力学剪切作为抗原特异性T细胞富集的一个正交参数，并为将基于力的筛选与肿瘤来源pMHC相结合以分离功能性抗原特异性T细胞提供了框架。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.08.737133v1?rss=1

🏷️ 微流控平台 T细胞富集 肿瘤抗原 流体动力剪切 pMHC捕获 过继性T细胞治疗