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背景：三十年来，幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H. pylori）的表型抗生素药物敏感性检测（antibiotic susceptibility testing，AST）一直依赖细菌培养，通常需要5–7天才能获得结果。基因型快速检测只能识别已知的耐药突变，且无法可靠地鉴定阿莫西林耐药性。据我们所知，此前尚无关于幽门螺杆菌无培养快速表型AST方法的报道。 方法：我们开发了一种基于荧光快速现场评估（rapid on-site evaluation，ROSE）技术的表型AST方法，能够完全绕过细菌培养。采集40例幽门螺杆菌阳性患者的胃黏膜活检标本，进行匀浆处理后，与基于吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide，AO/EB）的活性染色试剂及3种一线抗生素（阿莫西林、克拉霉素和左氧氟沙星）共同孵育，抗生素浓度设定为欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing，EUCAST）针对幽门螺杆菌所规定的断点浓度，在37°C条件下孵育1小时。随后使用酶标仪测定荧光强度。与无抗生素对照相比，荧光强度降低提示敏感，而无显著降低则提示耐药。传统基于培养的AST方法（E-test）作为参照方法。计算总体一致率、敏感性、特异性和Cohen's kappa系数。 结果：40份样本中有14份培养未成功，予以排除，最终纳入26份样本用于各抗生素的统计分析。ROSE方法与基于培养的AST之间的总体一致率分别为：阿莫西林84.6%（22/26）、左氧氟沙星76.9%（20/26）和克拉霉素69.2%（18/26）。Cohen's kappa系数显示，3种抗生素的一致性均为中等水平（κ = 0.523、0.539和0.412）。不同于基因型方法，ROSE方法成功评估了全部40例患者的阿莫西林敏感性；阿莫西林是一种关键的一线抗生素，而目前尚不存在可靠的遗传耐药标志物用于其耐药性判定。该方法的检测周转时间约为1小时（55–65分钟），而基于培养的方法需5–7天；初步估算显示，每例患者的费用可减少约3000–5000元人民币（CNY），主要归因于无需培养基、无需长时间孵育以及减少重复门诊就诊。 结论：本研究首次报道了一种针对幽门螺杆菌的无培养、1小时内完成的表型AST方法。该方法能够支持当日完成基于药敏结果指导的治疗决策，满足了这一持续三十年的临床未满足需求。目前，相关算法优化及前瞻性随机对照试验正在进行中，以进一步提高诊断准确性并验证其临床应用价值。
背景：三十年来，幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H. pylori）的表型抗生素药物敏感性检测（AST）一直依赖细菌培养，获得结果需要5–7天。基因型快速检测只能检出已知的耐药突变，且无法可靠识别阿莫西林耐药性。据我们所知，此前尚无关于幽门螺杆菌无培养快速表型AST方法的报道。
方法：我们开发了一种基于荧光快速现场评估（ROSE）技术的表型AST方法，可完全绕过细菌培养。采集40例幽门螺杆菌阳性患者的胃黏膜活检标本，进行匀浆处理后，与基于吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）的活性染色试剂以及3种一线抗生素（阿莫西林、克拉霉素和左氧氟沙星）共同孵育，抗生素浓度设定为欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（EUCAST）针对幽门螺杆菌规定的断点浓度，在37°C下孵育1小时。随后使用酶标仪测定荧光强度。与无抗生素对照相比，荧光强度降低提示敏感，而无显著降低则提示耐药。以传统培养法AST（E-test）作为参考方法。计算总体一致率、敏感性、特异性和Cohen's κ系数。
结果：40份样本中有14份培养失败并被排除，最终每种抗生素均有26份样本纳入统计分析。ROSE方法与基于培养的AST之间的总体一致率分别为：阿莫西林84.6%（22/26）、左氧氟沙星76.9%（20/26）和克拉霉素69.2%（18/26）。Cohen's κ系数显示3种抗生素的一致性均为中等水平（分别为κ = 0.523、0.539和0.412）。不同于基因型方法，ROSE方法成功评估了全部40例患者的阿莫西林敏感性；阿莫西林是一种关键的一线抗生素，而目前尚无可靠的遗传耐药标志物可用于其耐药性检测。该方法的周转时间约为1小时（55–65分钟），而基于培养的方法需要5–7天；初步估算显示，每例患者可节省约3,000–5,000元人民币（CNY）的成本，主要归因于无需培养基、无需长时间孵育以及减少复诊次数。
结论：本研究首次报道了一种针对幽门螺杆菌的无培养、1小时表型AST方法。该方法可支持当日基于药敏结果的治疗决策，满足了持续三十年的临床未竟需求。目前，相关算法优化及前瞻性随机对照试验正在进行中，以进一步提高诊断准确性并验证其临床应用价值。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.06.736681v1?rss=1
🏷️ 幽门螺杆菌 抗菌药物敏感性检测 无培养表型检测 荧光活性染色 快速现场评估