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背景与目的：肝移植可改善肝细胞癌（HCC）患者的结局，然而对于肿瘤复发患者，治疗选择仍主要局限于酪氨酸激酶抑制剂。靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）的CAR T细胞提供了一种肿瘤定向的免疫治疗策略，但其疗效可能受到移植后免疫抑制的限制。我们开发了一种CAR T细胞平台，将CRISPR/Cas9介导的FKBP1A敲除与TRAC敲除相结合：前者赋予细胞对依赖FKBP12的免疫抑制剂（包括他克莫司、依维莫司和西罗莫司）的耐受性，后者消除内源性T细胞受体表达并降低同种异体反应性。 方法：采用靶向FKBP1A和TRAC的Cas9核糖核蛋白复合物对人T细胞进行编辑、扩增，并转导抗GPC3 CAR构建体。在体外评估细胞因子产生和细胞毒性。在Hep G2异种移植模型中评估他克莫司治疗条件下的抗肿瘤活性，并在移植物抗宿主病模型中评估异种反应性。采用mTOR抑制剂筛选联合基于CD3的磁性活化细胞分选（MACS）去除，对FKBP1A/TRAC双敲除T细胞进行富集。使用肝移植受者的外周血单个核细胞（PBMC），评估该策略在移植后早期进行临床转化的可行性。 结果：他克莫司抑制野生型CAR T细胞功能，但不抑制FKBP1A/TRAC双敲除CAR T细胞；后者保留了细胞因子产生、细胞毒性及体内抗肿瘤活性。环孢素A仍具有抑制作用，因此可作为一种药理学控制策略加以应用。TRAC敲除降低了异种反应性。基于CD3的MACS去除联合mTOR抑制实现了超过98%的功能性双敲除效率，且不影响细胞活力。移植后30天的患者PBMC样本可成功制备出具有功能性的FKBP1A/TRAC敲除CAR T细胞。 结论：双重编辑的GPC3 CAR T细胞能够耐受以他克莫司为基础的免疫抑制，同时限制同种异体反应性，支持其用于肝移植后复发HCC的治疗。在模块化细胞工程框架中进行序贯、高活力筛选，使其能够适配其他肿瘤靶点及新一代CAR T细胞设计。
用于肝移植后肝细胞癌复发的CAR T细胞工程化改造 | bioRxiv
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用于肝移植后肝细胞癌复发的CAR T细胞工程化改造
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Lorenz Kocheise， Gabriel Bacil， Pavan Bhimalli， Mohamed-Reda Benmebarek， Dan Li， Patrick Huang， Chi Ma， Vinona Muralidaran， Jorge Hernandez-Felix， Joseph R. Bugliarelli， Raj Chari， Kylynda Bauer， Yuta Myojin， Sarah Firdaus， Xiao Bin Zhu， Corbin Morris， Firouzeh Korangy， Alexander Kroemer， Mitchell Ho， Tim F. Greten
doi： https://doi.org/10.64898/2026.06.30.735569
Lorenz Kocheise 1 美国国立癌症研究所； 在 Google Scholar 上查找该作者 在 PubMed 上查找该作者 在持有人为作者/资助方，其已授予 bioRxiv 永久展示该预印本的许可。 本文为美国政府作品。根据《美国法典》第 17 编第 105 条，其不受版权保护，同时亦依据 CC0 许可开放使用。
返回顶部 上一页 下一页 发布于 2026 年 7 月 05 日。 下载 PDF 补充材料 电子邮件 感谢您有兴趣帮助传播 bioRxiv。 您的电子邮件 * 您的姓名 * 发送至 * 请输入多个地址，每行一个，或用逗号分隔。 您将要发送以下内容的电子邮件 《肝移植后肝细胞癌复发的 CAR T 细胞工程化》 邮件主题 （您的姓名）已从 bioRxiv 转发一个页面给您 邮件正文 （您的姓名）认为您可能希望查看 bioRxiv 网站上的此页面。 您的个人留言 验证码 此问题用于测试您是否为人类访问者，并防止自动垃圾信息提交。 分享 《肝移植后肝细胞癌复发的 CAR T 细胞工程化》 Lorenz Kocheise， Gabriel Bacil， Pavan Bhimalli， Mohamed-Reda Benmebarek， Dan Li， Patrick Huang， Chi Ma， Vinona Muralidaran， Jorge Hernandez-Felix， Joseph R. Bugliarelli， Raj Chari， Kylynda Bauer， Yuta Myojin， Sarah Firdaus， Xiao Bin Zhu， Corbin Morris， Firouzeh Korangy， Alexander Kroemer， Mitchell Ho， Tim F. Greten bioRxiv 2026.06.30.735569； doi： https://doi.org/10.64898/2026.06.30.735569 分享本文： 复制 引文工具 《肝移植后肝细胞癌复发的 CAR T 细胞工程化》 Lorenz Kocheise， Gabriel Bacil， Pavan Bhimalli， Mohamed-Reda Benmebarek， Dan Li， Patrick Huang， Chi Ma， Vinona Muralidaran， Jorge Hernandez-Felix， Joseph R. Bugliarelli， Raj Chari， Kylynda Bauer， Yuta Myojin， Sarah Firdaus， Xiao Bin Zhu， Corbin Morris， Firouzeh Korangy， Alexander Kroemer， Mitchell Ho， Tim F. Greten bioRxiv 2026.06.30.735569； doi： https://doi.org/10.64898/2026.06.30.735569
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🏷️ CAR-T细胞 肝细胞癌 肝移植后复发 CRISPR/Cas9编辑 GPC3靶向 免疫抑制耐受