上下文化实时质谱改进糖基化检测与表征

糖基化是一种结构高度多样且非模板驱动的修饰，其通过液相色谱-质谱联用进行分析时，受到为蛋白质组学开发的发现模式采集规则的限制。数据依赖性采集的筛选机制，如基于强度的前体选择和电荷态排除，与聚糖分析的适配性较差，因为聚糖的电荷态和丰度跨越范围广泛，且与其生物学重要性并不独立对应。在此，我们提出糖基化实时质谱（GlycoRTMS），这是一种基于仪器应用程序接口的方法，可实时以聚糖组成对观测到的前体质量进行注释，并利用这一上下文信息指导碎裂过程。基于组成感知的前体优先级排序可对前体空间进行更深层次的采样，使透明质酸水解产物的MS2覆盖范围由四个扩展至八个寡糖亚基。针对寡糖优化的电荷态特异性碰撞能方程产生了完整的碎片梯，而固定归一化碰撞能则未能实现这一点。由诊断离子和聚糖组成匹配共同门控的MS3触发，实现了对O-乙酰化唾液酸的高效、与色谱兼容的表征，并鉴定出对O-乙酰化具有特异性的产物离子。总体而言，这些策略在单次进样中同时提高了聚糖检测与表征的深度和质量。

糖基化是一种结构高度多样、非模板驱动的修饰，其通过液相色谱-质谱联用进行分析时，受到为蛋白质组学开发的发现模式采集规则的限制。数据依赖采集中的筛选条件，例如基于强度的前体选择和电荷态排除，并不适用于糖链分析；糖链的电荷态和丰度跨度很大，且与其生物学重要性并不独立对应。本文提出糖基化实时质谱分析方法（GlycoRTMS），这是一种基于仪器API的方法，能够实时用糖链组成对观测到的前体质量进行注释，并利用这一信息引导碎裂过程。基于组成感知的前体优先级策略能够更深入地覆盖前体空间，使透明质酸水解产物的MS2覆盖范围由四个寡糖亚基扩展至八个。针对寡糖定制的电荷态特异性碰撞能方程，在固定归一化碰撞能无法实现的情况下，产生了完整的碎片梯级。由诊断离子和糖链组成匹配共同门控的MS3触发，实现了对O-乙酰化唾液酸的高效且与色谱兼容的表征，并鉴定出对O-乙酰化具有特异性的产物离子。总体而言，这些策略在一次进样中同时提升了糖链检测与表征的深度和质量。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.03.736344v1?rss=1

🏷️ 糖基化 实时质谱 聚糖表征 液相色谱-质谱联用 前体选择 唾液酸O-乙酰化