胆固醇酯水解酶的搜寻：鉴定脂蛋白脂肪酶为胆固醇酯酶

胆固醇酯（CE）是胆固醇储存与转运过程中的核心中间体，然而，在哺乳动物中负责其水解的酶仍未得到明确定义。尽管溶酶体酸性脂肪酶是目前唯一被充分确立的酸性CE水解酶，但在生理上具有重要意义的中性CE水解酶的分子身份始终未获解析。在本研究中，我们采用基于底物的LC-MS检测、组织分级分离以及抑制剂筛选，系统描绘了小鼠组织和血液中的CE水解酶活性。我们观察到多种组织及循环系统中存在显著的CE水解酶活性，且该活性主要富集于膜组分，并对广谱代谢性丝氨酸水解酶抑制剂表现出高度敏感性。药理学筛选排除了先前提出的中性CE水解酶，包括NCEH1和LIPE，并鉴定出对四氢脂他汀敏感的脂蛋白脂肪酶（LPL）作为候选CE水解酶。在RAW264.7巨噬细胞中开展的竞争性基于活性的蛋白质谱分析进一步支持了LPL的选择性富集及其受抑制特征。生化表征表明，重组野生型LPL而非其催化位点突变体S159A，能够在体外高效水解CE。重要的是，这一活性需要与脂肪酶成熟因子1共同表达，表明LPL介导的CE水解依赖于酶的正确成熟。综上，这些发现鉴定出LPL是一种此前未被认识的哺乳动物CE水解酶，并将其功能作用扩展至甘油三酯代谢之外。

胆固醇酯（CE）是胆固醇储存与转运中的核心中间体，然而，在哺乳动物中负责其水解的酶迄今仍未得到清晰界定。尽管溶酶体酸性脂肪酶是目前唯一被充分确立的酸性CE水解酶，但在生理上具有重要意义的中性CE水解酶的分子身份仍未明确。在本研究中，我们采用基于底物的LC-MS检测、组织分级分离以及抑制剂筛选，系统描绘了小鼠组织和血液中的CE水解酶活性谱。我们观察到多种组织及循环系统中均存在显著的CE水解酶活性，且该活性主要富集于膜组分，并对广谱代谢性丝氨酸水解酶抑制剂表现出高度敏感性。药理学筛选排除了先前提出的中性CE水解酶，包括NCEH1和LIPE，并鉴定出对四氢脂抑素敏感的脂蛋白脂肪酶（LPL）为候选CE水解酶。在RAW264.7巨噬细胞中进行的竞争性基于活性的蛋白质谱分析进一步支持了LPL的选择性富集与抑制。生物化学表征表明，重组野生型LPL而非其催化位点突变体S159A能够在体外高效水解CE。值得注意的是，这一活性依赖于脂肪酶成熟因子1的共表达，表明LPL介导的CE水解依赖于酶的正确成熟。综上，这些发现鉴定出LPL是一种此前未被认识的哺乳动物CE水解酶，并将其功能作用从甘油三酯代谢扩展至更广泛的领域。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.07.02.736233v1?rss=1

🏷️ 胆固醇酯水解 脂蛋白脂肪酶 中性胆固醇酯酶 LC-MS检测 巨噬细胞 脂质代谢