表达关联启动子筛选（ELiPS）为基因治疗应用设计短小、高强度的广谱启动子

基于腺相关病毒（AAV）的基因治疗在向多种靶细胞群体实现高效递送方面已取得稳步进展，然而，该病毒5 kb的包装容量限制仍然对有效载荷表达，且在某些情况下对细胞选择性表达，构成挑战。在此，我们提出表达关联启动子筛选（Expression-Linked Promoter Selection, ELiPS），这是一种高通量平台，可利用AAV表达平台生成并进行功能筛选超过10^6种工程化短启动子变体。ELiPS依赖一种Golden Gate克隆方法，在最小启动子、GFP以及独特的3'条形码上游构建由所选转录因子结合位点（TFBS）组成的随机寡聚体。 作为概念验证，为了构建短小（约250 bp）、合成的广谱性启动子，我们应用ELiPS构建了两个文库，这两个文库由广泛表达的转录因子（TF）的TFBS组成，并通过AAV介导的体外转导对其进行筛选。该策略鉴定出在体外表达水平超过人巨细胞病毒（CMV）启动子和CAG启动子的启动子，其中一个变体能够在体内驱动B结构域缺失型第VIII因子（BDDFVIII）的治疗性表达，其表达水平与肝特异性启动子基准相当。因此，ELiPS建立了一个可扩展的启动子发现框架，能够设计紧凑的广谱性或细胞选择性表达盒，从而进一步提升基于AAV的基因治疗的精准性和有效性。

基于腺相关病毒（AAV）的基因治疗在向多种靶细胞群体实现高效递送方面已取得稳步进展，然而，该病毒 5 kb 的包装容量上限仍然是实现有效载荷表达、并在某些情况下实现细胞选择性表达的一项挑战。在此，我们提出表达关联型启动子筛选（ELiPS），这是一个用于生成并进行功能筛选的高通量平台，可筛选超过 10

DVS、KKL 和 JvH 是与该技术相关专利申请的发明人。DVS 与 Amber 和 Epicrispr 存在财务关系，且其本人及这些公司都可能从本研究结果的商业化中获益。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.25.734611v1?rss=1

🏷️ 基因治疗 AAV载体 合成启动子 高通量筛选 转录因子结合位点 表达调控