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DNA 条形码抗体是广泛空间分析与解离分析检测及应用的核心组成部分，包括多重成像、单细胞分析和邻近检测。通过以定义明确的 DNA 条形码对一抗进行直接修饰，可为蛋白质的多重标记提供灵活的面板设计。然而，传统的抗体-寡核苷酸偶联方法效率低、通量低且易受批次差异影响，从而限制了正交条形码抗体面板的可靠构建。这些挑战在初始面板开发阶段尤为突出，因为冗长的实验流程、偶联失败、大量抗体投入需求以及对定制抗体制剂的依赖，都会增加实验成本和工作量。 基于抗体 Fc 结构域结合蛋白的位点特异性偶联策略提供了一种很有前景的替代方案。我们对这一基础方法进行了优化，以确立其与细胞和组织中多重成像的兼容性；然而，构建完整的条形码文库仍然需要大量资源。这是因为每一种独特的 DNA 条形码在连接到抗体之前，都必须首先通过化学方式连接到一个独立的结合蛋白上。为克服快速且可靠地产生 DNA 条形码抗体面板这一关键瓶颈，我们提出了通用寡核苷酸接头（UnO）策略。UnO 从根本上将工作流程由条形码特异性偶联转变为通用条形码转换。我们在已建立的光反应性蛋白 G 结合蛋白基础上，结合了一种携带第二种超快速光交联基团 3-氰基乙烯基咔唑（cnvK）的通用寡核苷酸。由此构建出一种双功能接头：其中一个光反应性基团可实现与抗体的共价连接，而含 cnvK 的通用寡核苷酸则可在单一步骤中通过杂交和紫外交联同时捕获用户定义的 DNA 条形码。与其为数十种条形码分别制备独立的偶联反应，UnO 作为单一试剂，可在数分钟内将任意所需条形码共价连接到少量现成的一抗上。我们在用于多重免疫染色的亚细胞 Immuno-SABER 和基于组织的 CODEX 工作流程中验证了该方法的通用性与模块化特征。通过将抗体条形码化转变为一种模块化、一步式的核酸接头工作流程，UnO 降低了构建 DNA 条形码抗体面板的成本、时间和复杂性，并为 DNA 赋能的多重蛋白检测这一核心瓶颈提供了一种高效且易于获取的解决方案。
DNA 条形码抗体是广泛空间检测与解离检测实验及其应用的核心组成部分，包括多重成像、单细胞分析和邻近检测。利用预定义的 DNA 条形码对一抗进行直接修饰，可为蛋白质的多重标记提供灵活的面板设计。然而，传统的抗体-寡核苷酸偶联方法效率低、通量有限，且容易产生批次间差异，从而限制了正交条形码抗体面板的可靠制备。这些挑战在初始面板开发阶段尤为突出，因为冗长的实验流程、偶联失败、较大的抗体投入需求以及对定制抗体制剂的依赖，都会增加实验成本和工作量。
基于抗体 Fc 结构域结合分子的位点特异性偶联策略提供了一种很有前景的替代方案。我们对这一基础方法进行了优化，使其适用于细胞和组织中的多重成像；然而，构建完整的条形码文库仍然需要大量资源。这是因为每一种独特的 DNA 条形码在连接到抗体之前，都必须先通过化学方式与一个独立的结合分子相连。为克服快速且可靠地构建 DNA 条形码抗体面板这一关键瓶颈，我们提出了通用寡核苷酸接头（UnO）策略。UnO 从根本上将工作流程由条形码特异性偶联转变为通用条形码转换。我们在已建立的光反应性蛋白 G 结合分子基础上，结合了一种携带第二种超快速光交联基团 3-氰乙烯基咔唑（3-cyanovinylcarbazole，cnvK）的通用寡核苷酸。由此构建出一种双功能接头：其中一个光反应基团实现与抗体的共价连接，而含 cnvK 的通用寡核苷酸则通过杂交与紫外交联，在单一步骤中同步捕获用户定义的 DNA 条形码。不同于为数十种条形码分别制备独立的偶联反应，UnO 作为一种单一试剂，可在数分钟内将任意所需条形码共价偶联到少量现成的一抗上。我们在用于多重免疫染色的亚细胞 Immuno-SABER 和基于组织的 CODEX 工作流程中验证了该方法的普适性和模块化特征。通过将抗体条形码化转变为一种模块化、一步完成的核酸接头工作流程，UnO 降低了构建 DNA 条形码抗体面板的成本、时间和复杂性，并为 DNA 赋能的多重蛋白检测中的一个核心瓶颈提供了高效且易于获取的解决方案。
📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.16.730979v1?rss=1
🏷️ DNA条形码抗体 寡核苷酸接头 多重免疫成像 抗体偶联 空间蛋白检测