从微克量人乳中无标记测定硫酸软骨素

人乳含有结构多样的聚糖，在塑造婴儿发育方面发挥关键作用，然而分析方法上的限制制约了对低体积样本的表征。糖胺聚糖（GAG），包括硫酸软骨素（CS），由于现有方案要求至少 5 mL 的样本体积，并且在仪器分析前需要耗时较长的提取步骤，因此研究尚不充分。本研究建立了一种可从 25 μL 人乳中定量 CS 二糖的工作流程，使此前无法进行 GAG 谱分析的样本得以分析，例如从新生儿重症监护病房收集的补救性样本。对于 CS 定量，首先使用硫酸软骨素酶 ABC 对 CS 进行酶促解聚，以释放重复二糖单元。通过两轮基于乙腈的蛋白质和脂质沉淀降低基质复杂性。采用亲水相互作用液相色谱分离二糖，并使用三重四极杆质谱仪进行检测，从而为所有 CS 二糖提供稳健的检测灵敏度。方法开发与验证采用足月婴儿的混合成熟人乳进行。该工作流程可检测所有 CS 二糖，并且对总 CS 具有较低但可重复的回收率。低水平和高水平加标回收率分别为 41.3%（RSD

CJS 声明曾接受雀巢营养研究所的讲课酬金。他不持有股份期权，也不存在其他利益冲突。SA 和 PMM 为雀巢产品有限公司（Societe des Produits Nestle S.A.）的雇员。MG 为一名博士生，其资助来自 BBSRC 协作培训伙伴计划，雀巢参与其中并提供资金支持。

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🏷️ 人乳 硫酸软骨素 糖胺聚糖 液相色谱-质谱 方法学验证