通过辅助依赖型腺病毒载体在猪基因组中增强 CRISPR/Cas9 介导的 CFTR 替换的双位点靶向策略

基因治疗在基因编辑技术出现后一直是广泛研究的主题。对于存在难以靶向组织的遗传性疾病，如囊性纤维化（CF），开发有效的基因治疗仍面临诸多挑战。一种具有潜在普适性的基因替代方法是在利用CRISPR/Cas9等基因编辑工具产生DNA双链断裂后，插入具有功能的CFTR基因。然而，这一策略尚未取得临床意义上的成功，因为CRISPR/Cas9介导的CFTR整合主要受限于同源定向修复（HDR）通路活性较低这一问题。为克服这一限制并提高CFTR转基因的整合与表达，我们探索了一种增加第二整合位点的方法，并将其命名为双位点靶向方法。利用辅助依赖型腺病毒载体（HDAd）递送的CRISPR/Cas9系统在猪上皮细胞中进行研究时，我们发现依次递送两种载体——一种靶向CFTR位点，另一种靶向基因组安全港位点GGTA1——可将lacZ和CFTR供体基因的整合效率分别提高至16.5%和3.4%。这些结果表明，该策略有望提高CFTR替代的效率，从而推动开发一种用于治疗CF肺部疾病的普适性且永久性的基因治疗方案。

基因治疗在基因编辑技术问世后一直是广泛研究的主题。对于具有难以靶向组织的遗传性疾病，例如囊性纤维化（CF），开发有效的基因治疗仍面临诸多挑战。一种具有潜在普适性的基因替代方法是在利用CRISPR/Cas9等基因编辑工具产生DNA双链断裂后，插入功能性CFTR基因。然而，这一策略尚未取得临床意义上的进展，因为CRISPR/Cas9介导的CFTR整合主要受限于同源定向修复（HDR）通路活性较低这一问题。为规避这一限制并提高CFTR转基因的整合与表达，我们探索了一种增加第二整合位点的方法，并将其称为双位点靶向方法。利用辅助依赖型腺病毒载体（HDAd）递送的CRISPR/Cas9系统，在猪上皮细胞中，我们发现依次递送两种载体——一种靶向CFTR位点，另一种靶向基因组安全港位点GGTA1——可将lacZ和CFTR供体基因的整合效率分别提高至16.5%和3.4%。这些结果表明，这是一种有潜力提高CFTR替代效率的策略，可用于开发针对CF肺部疾病的普适性和永久性基因治疗方案。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.10.731381v1?rss=1

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