细胞类型靶向的 CRISPR/Cas9 介导的小鼠 VTA 多巴胺能神经元中 Clock 基因敲低会改变睡眠、行为和细胞兴奋性

双相情感障碍（BD）是一种严重的精神疾病，其特征为反复发作的躁狂、抑郁以及昼夜节律紊乱。在与情绪相关功能障碍有关的昼夜节律调控因子中，Clock 已成为一个机制上尤为有力的候选基因。然而，Clock 在与情绪相关神经环路内不同细胞类型中的特异性功能仍未得到充分界定。 在本研究中，我们开发并应用了一种 Cre 依赖性 AAV-SaCas9 基因编辑策略，以选择性破坏腹侧被盖区多巴胺能神经元中的 Clock。我们首先建立了一条快速的体外筛选流程用于 guide RNA 的选择，该流程能够准确预测体内编辑效率。随后，我们采用基于单一 AAV 的编辑策略在体内靶向 Clock，并通过靶向测序、原位杂交和免疫组织化学观察到 Clock 表达出现了显著且依赖滴度的降低。我们从多个分析层面评估了 Clock 破坏所带来的功能后果，包括行为学测试组合、利用 EEG 和 EMG 进行的昼夜节律及睡眠-觉醒测量，以及电生理记录。 这些结果建立了一个用于快速、细胞类型特异性破坏候选精神疾病风险基因的实用框架，并提供了一个具有明确机制基础的模型，以研究中脑边缘多巴胺能环路中 Clock 功能缺失如何促成与 BD 相关的表型。

双相情感障碍（bipolar disorder, BD）是一种严重的精神疾病，其特征为反复发作的躁狂、抑郁以及昼夜节律紊乱。在与情绪相关功能障碍有关的昼夜节律调控因子中，Clock 已成为一个机制上尤为有力的候选基因。然而，Clock 在与情绪相关神经环路内不同细胞类型中的特异性功能仍未得到充分界定。

在本研究中，我们开发并应用了一种 Cre 依赖性的 AAV-SaCas9 基因编辑策略，以选择性破坏腹侧被盖区多巴胺能神经元中的 Clock。我们首先建立了一条快速的体外筛选流程，用于 guide RNA 的选择，且该流程能够准确预测体内编辑效率。随后，我们采用基于单一 AAV 的编辑策略在体内靶向 Clock，并通过靶向测序、原位杂交和免疫组织化学观察到 Clock 表达呈现显著的、依赖滴度的降低。我们从多个分析层面评估了 Clock 破坏的功能后果，包括行为学测试组合、基于 EEG 和 EMG 的昼夜节律及睡眠-觉醒测量，以及电生理记录。

这些结果建立了一个用于快速、细胞类型特异性破坏候选精神疾病风险基因的实用框架，并提供了一个具有机制基础的模型，用于探究中脑边缘多巴胺能环路中 Clock 功能缺失如何促成与 BD 相关的表型。

📄 原文链接：https://www.biorxiv.org/content/10.64898/2026.06.03.730017v1?rss=1

🏷️ CRISPR/Cas9基因编辑 Clock基因 VTA多巴胺能神经元 睡眠-觉醒调控 双相情感障碍模型 细胞类型特异性敲低